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三阴性乳腺癌（TNBC）的免疫抑制性肿瘤微环境（TME）治疗困难。研究人员基于 CRISPR/Cas9 介导的平台开展 oHSV1 工程研究，对比不同细胞因子的疗效。结果显示 IL15Fu 有潜力，为 TNBC 治疗提供参考。
在癌症治疗的战场上，三阴性乳腺癌（TNBC）一直是一块难啃的 “硬骨头”。它就像一个狡猾的敌人，由于缺乏雌激素受体、孕激素受体以及 HER2 扩增，对常规的靶向治疗手段 “免疫”，而且其具有侵袭性强、易转移的特点，让医生们头疼不已。更糟糕的是，TNBC 的肿瘤微环境（TME）是一个高度免疫抑制的 “黑暗世界”，充斥着髓源性抑制细胞（MDSCs）、功能失调的树突状细胞（DCs），肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）却寥寥无几，这使得免疫检查点抑制剂等常规免疫疗法也难以施展拳脚。
在这样的困境下，溶瘤单纯疱疹病毒 1 型（oHSV1）带着双重 “武器”—— 直接肿瘤裂解和免疫原性细胞死亡介导的免疫激活，成为了抗癌的新希望。通过给 oHSV1 装上免疫调节细胞因子这一 “强力弹药”，有望增强其抗癌效果。然而，此前大多数研究都是孤立地评估单个细胞因子，很少考虑肿瘤特异性免疫环境以及进行比较机制分析，就像在黑暗中摸索，没有明确的方向。
为了照亮这片黑暗，昆明医科大学的研究人员挺身而出。他们决心深入探索，为 TNBC 的治疗找到更有效的方法。研究人员开发了一个基于 CRISPR/Cas9 的工程平台，利用这个高效的平台，他们将 oHSV1 的 ICP47 基因位点替换为小鼠 IFN-γ、GM-CSF 或 IL-15Rα/IL-15 融合蛋白（IL15Fu），就像是给 oHSV1 定制了不同的 “武器装备” ，然后在 4T1 TNBC 模型和一系列人类癌细胞系中，对这些改造后的病毒进行全方位评估。
在这场研究中，研究人员用到了几个关键的技术方法。首先是 CRISPR/Cas9 基因编辑技术，通过设计特定的向导 RNA 序列，精准地对 oHSV1 的基因组进行编辑；构建小鼠 4T1 TNBC 同基因模型，为研究提供了贴近真实情况的实验对象；运用 RNA 测序技术，深入分析肿瘤组织的基因表达变化，探寻免疫调节的分子机制；利用流式细胞术，对肿瘤浸润免疫细胞和脾细胞进行详细分析，了解免疫细胞的功能状态。
研究结果令人眼前一亮。在病毒构建方面，CRISPR 平台展现出强大的实力，实现了 62.5 - 71.4% 的同源重组效率，让病毒构建变得又快又准。体外实验中，OV-IFNG 表现突出，它显著上调了 MHC I/II 的表达，增强了癌细胞的免疫原性，就像给癌细胞贴上了 “攻击我” 的标签，同时展现出强大的细胞毒性；而 OV-GMCSF 却在部分乳腺癌细胞系中减弱了溶瘤效果，就像一把双刃剑。在 4T1 小鼠模型中，OV-IL15Fu 带来了惊喜，它在没有明显毒性的情况下，适度地控制了肿瘤生长，延长了小鼠的生存期；OV-IFNG 虽然能强力激活免疫反应，但却因全身毒性导致部分小鼠早期死亡。
进一步深入研究发现，不同细胞因子改造的 oHSV1 在免疫调节方面有着独特的 “个性”。RNA 测序结果显示，OV-IL15Fu 能够富集 T 细胞 / NK 细胞的细胞毒性通路，就像给免疫细胞注入了 “强心针”，增强了它们的杀敌能力；OV-IFNG 则放大了细胞因子 / 趋化因子信号传导，引发了强烈的免疫反应；OV-GMCSF 却有些 “矛盾”，它在促进髓细胞募集的同时，抑制了 MHC-II 通路，影响了抗原呈递。流式细胞术分析也证实了这些功能差异，OV-IL15Fu 促进了细胞毒性淋巴细胞（CD8? T/NK 细胞）的扩增；OV-IFNG 优先推动 Th1 细胞极化和先天免疫激活；OV-GMCSF 尽管有髓细胞浸润，却未能有效激活 T 细胞。
综合这些研究结果，研究人员得出结论：在基于 oHSV1 的免疫治疗中，合理选择细胞因子至关重要。IFN-γ 虽然能增加免疫原性标记，但它的全身毒性和对髓细胞的影响限制了其治疗效果；GM-CSF 在 TNBC 的免疫抑制环境中，反而加剧了免疫抑制；而 IL15Fu 展现出了良好的免疫刺激特性，且没有明显的毒性，是 TNBC 靶向溶瘤病毒治疗中一个极具潜力的 “候选选手”，值得进一步深入研究。
这项研究发表在《Virology Journal》上，它的意义非凡。它就像一盏明灯，为临床 oHSV1 的开发提供了理性选择细胞因子的依据，强调了根据肿瘤特异性免疫环境来定制免疫调节有效载荷的重要性。同时，研究人员开发的高效 oHSV1 改造平台，也为未来溶瘤病毒疗法的发展打开了新的大门，有望让更多癌症患者从中受益，看到战胜癌症的曙光。
