靶向递送RGD偶联纳米脂质体负载ETV4反义寡核苷酸抑制乳腺癌转移的研究

为解决乳腺癌转移难题，研究人员开发了RGD偶联纳米脂质体负载ETV4反义寡核苷酸（ASO）的靶向递送系统。通过AFM、DLS和FTIR表征证实其50-120 nm球形结构，MTT和qPCR显示该载体能选择性降低MDA-MB-231和MCF-7细胞活力及ETV4 mRNA/蛋白表达（P<0.05），为乳腺癌基因治疗提供新策略。

　　

乳腺癌作为女性高发恶性肿瘤，转移是导致治疗失败的主因。ETS家族转录因子ETV4通过激活SNAIL、MMP₂/₉等促转移基因成为关键靶点，但传统递送系统存在靶向性差、稳定性不足等问题。伊朗伊斯兰阿扎德大学药学院的研究团队创新性设计RGD（精氨酰甘氨酰天冬氨酸）肽偶联纳米脂质体，实现ETV4反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide, ASO）的精准递送，相关成果发表于《Advances in Cancer Biology - Metastasis》。

研究采用生物信息学筛选ETV4 ASO序列，通过薄膜水化法制备RGD-纳米脂质体。动态光散射（DLS）显示其粒径50-120 nm（PDI=0.2），zeta电位-18至+7 mV，傅里叶变换红外光谱（FTIR）证实1634 cm^-1处酰胺键特征峰。体外实验以MDA-MB-231（三阴性乳腺癌）、MCF-7（ER⁺）及正常乳腺细胞MCF-10A为模型，结合MTT、qRT-PCR和Western blot评估效果。

3.1 生物信息学分析
UALCAN数据库显示ETV4表达与乳腺癌患者生存率显著负相关（P<0.01），启动子甲基化水平随癌症进展递减。OligoWalk预测获得高评分ASO序列UUUCUCAUAAUAGUAUCGG。

3.2 纳米载体表征
原子力显微镜（AFM）显示球形形态，稳定性测试表明5周内无聚集。负载效率达49.2%，FTIR在2820 cm^-1处检出脂质甲基特征峰，证实RGD成功偶联。

3.4 MTT实验
6.54 mg/mL RGD-纳米脂质体使MDA-MB-231存活率降至10%（vs 游离ASO的42%，P<0.05），但对MCF-10A影响微弱（存活率72%），证实RGD通过αVβ₃整合素实现肿瘤靶向。

3.5 qPCR与Western blot
高剂量组ETV4 mRNA表达降至0.1倍（MDA-MB-231）和0.11倍（MCF-7），蛋白水平同步下降（Pearson系数>0.94）。正常细胞中调控效果显著减弱，体现剂量依赖性和靶向特异性。

该研究创新性地将RGD的靶向性与纳米脂质体的载药优势结合，突破传统ASO递送瓶颈。值得注意的是，MDA-MB-231对治疗的敏感性高于MCF-7，与前者高表达αVβ₃整合素的特性相符。讨论部分指出，ETV4通过WNT和Hedgehog通路调控转移，而纳米载体在5周内的稳定性满足临床需求。与既往使用脂质体转染试剂（如Lipofectamine 2000）的研究相比，RGD修饰使细胞摄取效率提升3倍以上。

局限性在于尚未开展动物实验验证体内效果，且未检测下游MMP₂/₉等效应分子变化。研究者建议后续可探索RGD与其他靶向肽（如tLyp-1）的协同作用，并优化脂质组成以延长循环半衰期。该工作为乳腺癌精准治疗提供新工具，其模块化设计策略亦可拓展至其他致癌基因的沉默研究。