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维立西呱（VER）是治疗心脏病的重要药物，现有分析方法存在不足。研究人员以赤藓红 B（EB）为传感器，开发了 VER 的分光光度和荧光光谱分析新方法。结果显示方法简便、灵敏且环保，为 VER 质量控制分析提供了新途径。
在医学领域，心脏病一直是威胁人类健康的重要杀手。维立西呱（Vericiguat，VER）作为一种全新的可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）刺激剂，自 2021 年获 FDA 批准及欧盟许可使用后，在治疗心脏病及其症状方面发挥着关键作用。它能改善心脏泵血效率、舒张血管，促进全身血液循环。然而，在药物研发和质量控制过程中，精准分析药物含量至关重要。此前虽已有多种分析 VER 的方法，如色谱法、分光光度法和荧光光谱法等，但仍存在一些局限性，无法完全满足快速、灵敏且环保的分析需求。为了突破这些困境，来自埃及代雷亚大学（Deraya University）药学院药物化学系的研究人员，开展了一项极具创新性的研究。他们将目光聚焦于食品着色剂赤藓红 B（Erythrosine B，EB），利用其独特的化学性质，开发出两种用于测定 VER 的新方法 —— 分光光度法和荧光光谱法。
研究人员为开展这项研究，主要运用了以下关键技术方法：采用 JASCO FP - 83 荧光分光光度计进行荧光光谱测量，T80 双光束紫外 - 可见分光光度计结合 UV - Win 软件进行分光光度测量；通过 Job’s 法和极限对数法确定反应化学计量比；利用绿色分析程序指数（Green Analytical Procedure Index，GAPI）和分析绿色度计算器（Analytical Greenness Calculator，AGREE）评估方法的绿色程度。
优化反应条件
研究人员考察了多个可能影响 EB 与 VER 离子对形成的变量，如缓冲液 pH 和体积、试剂（EB）体积、表面活性剂、稀释介质和反应时间等。发现 pH 为 4 时，离子对复合物的吸光度最大；对于荧光光谱法，0.7 mL 浓度为1×10?4 M 的 EB 能产生最佳荧光猝灭效果，而分光光度法中，2.0 mL 浓度为5×10?4 M 的 EB 可获得最高吸光度。此外，蒸馏水作为稀释溶剂效果最佳，表面活性剂对离子对形成无明显影响，反应迅速且在 60 分钟内吸光度基本恒定，反应在室温（约 25℃）下进行最为适宜。
方法学验证
按照国际人用药品注册技术协调会（International Conference on Harmonization，ICH）Q2 要求对两种方法进行验证。荧光光谱法在 0.05 - 0.5 μg/mL 浓度范围内呈线性响应，检测限为 0.012 μg/mL，定量限为 0.036 μg/mL；分光光度法在 0.5 - 10.0 μg/mL 范围内线性良好，检测限为 0.131 μg/mL，定量限为 0.412 μg/mL。两种方法的精密度和准确度高，与对照方法相比无显著差异，且对实验条件的微小变化具有稳健性。
反应化学计量比研究
运用 Job’s 法和极限对数法研究 VER 与 EB 反应的化学计量比，结果表明在荧光光谱法和分光光度法中，EB 与 VER 的摩尔比均为 2:1。在弱酸性介质（pH 4.0）中，EB 的酚羟基更易电离，生成带负电的单价阴离子，与 VER 的阳离子通过静电作用和疏水作用形成离子对复合物。
量子产率计算
以罗丹明 6G 为参考计算 EB 的量子产率，发现 EB 的量子产率为 4.35%，加入 VER 后降至 3.26%，这进一步证实了 EB 与 VER 之间存在相互作用。
绿色度评估
使用 GAPI 和 AGREE 工具评估所开发方法的绿色度。GAPI 评估显示多数区域为绿色，虽存在部分红色和黄色区域，但整体绿色度较高；AGREE 评估结果显示方法绿色核心分数为 0.81，证明两种方法对环境友好。
在结论与讨论部分，研究人员开发的基于 EB 的分光光度法和荧光光谱法，首次实现了对 VER 原料药和片剂剂型的高效分析。这两种方法线性范围合适，操作简便、快速且灵敏，满足 VER 药物制剂质量控制分析的需求。与已发表方法相比无明显差异，且在多种辅料存在的情况下不受干扰，具有高选择性。同时，方法采用绿色化学原理，不使用有害有机溶剂，对环境友好。这一研究成果为 VER 的分析检测提供了新的可靠手段，推动了药物分析领域向绿色、高效方向发展，在心脏病治疗药物的质量控制和研发过程中具有重要意义，有望为未来相关药物分析研究提供新的思路和方法借鉴。
