浸泡法递送双链RNA激活对虾抗病毒免疫反应显著降低白斑综合征病毒致死率

为解决对虾幼虫阶段无法通过注射或摄食递送双链RNA(dsRNA)的难题，泰国玛希隆大学团队创新性采用浸泡法，证实dsRNA浸泡可激活RNA干扰(RNAi)通路(Dicer2/Ago2/Sid1)和非特异性免疫(IRF)，使白斑综合征病毒(WSSV)载量降低87%，死亡率下降64.5%，为水产养殖抗病毒提供了可规模化应用的新策略。

　　

在水产养殖领域，白斑综合征病毒(WSSV)堪称对虾的"头号杀手"，感染后3-10天内死亡率可达100%。尽管双链RNA(dsRNA)介导的基因沉默技术已被证明能有效抑制病毒复制，但传统注射法耗时费力，摄食法又难以应用于幼虫阶段。这一困境激发了泰国玛希隆大学团队Nipatthra Phromma-in等人的研究灵感——能否像给蔬菜施肥一样，通过简单浸泡就让对虾获得抗病毒能力？

研究团队选择太平洋白对虾(Litopenaeus vannamei)为模型，聚焦网格蛋白重链(CHC)这一病毒入侵的关键"门户"。他们设计了两组dsRNA：靶向CHC的dsCHC和作为对照的绿色荧光蛋白dsGFP。令人惊喜的是，仅3小时浸泡就显著上调了RNA干扰(RNA interference, RNAi)核心元件Dicer2、Ago2和Sid1的表达，虽然未检测到特异性mRNA沉默，但非特异性免疫因子IRF的激活为对虾构筑了双重防线。

关键技术包括：1) 荧光标记示踪证实dsRNA主要通过消化道吸收；2) qPCR检测RNAi通路基因表达；3) 攻毒实验设置低(0.5 μg/mL)、高(5 μg/mL)剂量组。结果发现，低剂量组WSSV鳃部病毒载量骤降87%，死亡率从对照组的47%降至16.6%；高剂量组虽最终全部死亡，但前两日死亡率显著延缓。

《Shrimp specimens》章节显示，实验选用100-200 mg的幼虾，在10‰盐度海水中进行标准化处理。《Delivery of soaked dsRNA》部分通过Cy3荧光标记证实，dsRNA主要经肝胰腺和肠道吸收。研究最终揭示：浸泡法虽未实现预期中的CHC基因沉默，却意外激活了更广泛的抗病毒防御网络。

这项发表于《Aquaculture》的研究具有三重突破意义：首先，建立了首个适用于对虾幼虫的dsRNA递送方案；其次，揭示了dsRNA浸泡可同时激活序列特异性(RNAi)和非特异性(IRF/Vago)免疫通路；最重要的是，该方法操作简便、成本低廉，每批次可处理数千只虾苗，为水产养殖业提供了可大规模推广的抗病毒解决方案。正如作者Pongsopee Attasart强调的，这项技术有望改写对虾病毒防控的产业格局。