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在水产养殖中，大口黑鲈常受疾病困扰。研究人员开展对大口黑鲈 C 型凝集素 MsCL-P1 的研究，发现其重组 CRD 能结合多种病原体相关分子模式（PAMPs）、微生物，有凝集和抗菌活性。该研究助力理解大口黑鲈免疫机制，为鱼类免疫研究添砖加瓦。
在水产养殖的广阔天地里，大口黑鲈（Micropterus salmoides）可是一位 “经济明星”，尤其在中国和亚洲等地区，它为养殖户们带来了可观的收益。然而，就像平静的湖面总会泛起涟漪，疾病成了大口黑鲈养殖产业的 “拦路虎”。这些疾病不仅威胁着大口黑鲈的健康，还影响着养殖产业的可持续发展。为了深入了解病原体与宿主之间的 “战争”，探寻大口黑鲈体内关键的免疫奥秘，研究人员踏上了探索之旅。此次研究成果发表在《Comparative Immunology Reports》上。
在这场探索中，研究人员主要运用了序列分析、重组蛋白表达与纯化、酶联免疫吸附测定（ELISA）、凝集试验、碳水化合物结合特异性测定以及抗菌活性测定等技术方法。通过对大口黑鲈肝脏转录组测序获得样本，进而开展一系列研究。
研究人员首先对 MsCL-P1 进行了序列分析。发现大口黑鲈 MsCL-P1 的全长 cDNA 有 2370bp，开放阅读框（ORF）编码 789 个氨基酸的多肽。它含有一个碳水化合物识别结构域（CRD）、四个卷曲螺旋区域和两个胶原结构域。不同物种的 CL-P1 的 CRD 结构域高度相似，都含有 “QPD” 和 “WND” 保守基序，这意味着 CL-P1 识别和结合非自身物质的特异性可能是保守的。
接着是重组 CRD 的原核表达和纯化。构建的重组质粒 pET - 30a - MsCL-P1 - CRD 转化到大肠杆菌 BL21 (DE3) 中，诱导表达后经镍离子螯合琼脂糖柱纯化，得到的重组蛋白 rCRD 经 SDS - PAGE 分析，其分子量为 60.3kDa，与预期相符。
在 PAMPs 结合活性研究中，ELISA 实验表明，rCRD 对脂多糖（LPS）、肽聚糖（PGN）和葡聚糖（GLU）都有结合亲和力，说明 MsCL-P1 的 CRD 区域在与多种 PAMPs 的相互作用中发挥着重要作用。
微生物结合活性研究同样借助 ELISA 进行，结果显示 rCRD 能与革兰氏阳性菌（藤黄微球菌 Micrococcus luteus 和金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ）、革兰氏阴性菌（维氏气单胞菌 Aeromonas veronii 和副溶血性弧菌 Vibrio parahaemolyticus）以及真菌（酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae）等五种不同的微生物结合，表明 MsCL-P1 的 CRD 在识别和结合多种微生物方面至关重要。
凝集活性研究选用了藤黄微球菌、维氏气单胞菌和酿酒酵母。结果发现 rCRD 对维氏气单胞菌和酿酒酵母有凝集活性，对藤黄微球菌无凝集活性，且其凝集的最低蛋白浓度为 0.325μM ，而对照组 rTrx 无凝集现象，说明 MsCL-P1 对某些微生物具有特异性凝集作用。
碳水化合物结合特异性研究发现，当 rCRD 与 D - 甘露糖或 D - 半乳糖预孵育后，其凝集功能受到抑制，表明 MsCL-P1 的 CRD 对 D - 甘露糖和 D - 半乳糖具有结合特异性。
最后，抗菌活性测定实验检测了 rCRD 对多种微生物增殖的抑制作用。结果显示 rCRD 能抑制藤黄微球菌、大肠杆菌 E. coli、维氏气单胞菌和酿酒酵母的生长。
综合研究结果和讨论部分，C 型凝集素作为模式识别受体（PRRs）在免疫中意义重大。MsCL-P1 的 CRD 含有 “QPD” 和 “WND” 保守基序，可能通过与 D - 半乳糖 / 甘露糖相互作用识别和结合 PAMPs。它能结合多种微生物，推测是通过微生物细胞表面的 PAMPs 发挥作用，在清除体内病原体方面意义非凡。而且 MsCL-P1 具有抗菌活性，可能是通过结合细菌表面的 PAMPs 凝集细菌，进而抑制细菌生长。这项研究增进了人们对大口黑鲈免疫机制的理解，为鱼类 C 型凝集素功能的研究提供了重要参考，在水产养殖病害防治领域有着潜在的应用价值，也为后续相关研究指明了方向，让人们对鱼类免疫的认识更上一层楼。
