综述：发育神经毒性作为新方法学（NAMs）可持续监管实施的六步框架案例

这篇综述系统阐述了以发育神经毒性（DNT）体外测试组合（IVB）为例的新方法学（NAMs）从开发到监管落地的六步框架，涵盖人类相关模型构建、测试路线图设计、方法可靠性验证、科学适配性评估、OECD认可及CRO商业化转化等关键环节，为替代动物实验的下一代风险评估（NGRA）提供结构化路径。

　　

发育神经毒性测试的革新之路：NAMs六步框架解析

引言
过去几十年间，新方法学（NAMs）在毒理学领域取得突破性进展，涵盖非哺乳动物模型、计算模拟（in silico）及体外（in vitro）技术。这些方法为替代传统动物实验、实现人类中心化的下一代风险评估（NGRA）奠定基础。本文以发育神经毒性（DNT）体外测试组合（IVB）为范例，揭示NAMs从实验室走向监管应用的完整生命周期。

Step 1：构建人类相关测试系统
NAMs的核心在于人类细胞模型。借助诱导多能干细胞（hiPSC）技术，2D培养已升级为3D微生理系统（MPS）和器官芯片。DNT测试需覆盖神经前体细胞增殖、迁移、突触形成等7个关键神经发育过程（KNDPs）。目前，三个实验室联合开发了8种测试系统，例如hiPSC衍生的神经网络模型。未来，欧洲PARC项目正推动DNT IVB 2.0开发，整合人类星形胶质细胞和髓鞘化功能。

Step 2：制定NAMs测试路线图
2014年国际利益相关方网络（ISTNET）会议确立了DNT测试战略：聚焦"共同关键事件"而非分子起始事件，通过功能扰动检测提高效率。该路线图被用于构建人类神经网络形成检测方法，并正拓展至发育与生殖毒性（DART）领域。

Step 3：测试方法就绪度评估
NAMs的可靠性取决于13项指标，包括细胞系统、暴露方案、标准操作规程（SOPs）等。DNT IVB通过"测试方法开发指南"和OECD 211格式文档实现标准化。值得注意的是，Good In Vitro Method Practices（GIVIMP）为方法开发提供通用规范。

Step 4：科学适配性验证
突破传统OECD验证模式，DNT IVB采用五维评估框架：

• 用途适配性：覆盖欧盟与美国从优先排序到风险评估全流程
• 人类相关性：KNDPs均与人类脑发育直接相关，转录组分析证实人鼠神经前体细胞差异
• 技术表征：已完成17种检测方法的实验室间转移，性能指标收录于OECD 377号文件
• 独立评审：通过OECD公开咨询和美国EPA专家小组审查
• 数据透明：原始数据公开于EPA ToxCast数据库

Step 5：OECD官方认可
2023年OECD发布DNT IVB建议书，描述检测方法神经发育相关性，并纳入综合测试与评估（IATA）框架。目前正推进指南文件制定，最终目标是成为OECD测试准则。

Step 6：CRO商业化转化
德国DNTOX GmbH和美国Cyprotex等合同研究机构（CRO）承担方法转化，确保符合良好实验室规范（GLP）。这一环节常被忽视，却是监管采纳的关键瓶颈。

展望
DNT IVB正推动欧盟"淘汰动物实验路线图"实施，支持"绿色新政"下的安全可持续设计（SSbD）框架。随着OECD协调的全球合作深化，该电池将助力各国完善化学安全评估，守护下一代大脑健康。当前挑战包括微胶质细胞功能整合、检测方法优化，以及更多化合物的测试验证。