揭示利什曼原虫（Mundinia）martiniquensis 对两性霉素 B 耐药的基因组奥秘

为探究利什曼原虫（Leishmania）（Mundinia）martiniquensis对两性霉素 B（AmpB）耐药机制，研究人员对比分析敏感和耐药菌株基因组。结果发现 AmpB 耐药菌株中特定基因突变，或为耐药新标记。这对防控利什曼病意义重大。

　　利什曼病是一种由利什曼原虫（Leishmania）引起的被忽视的热带疾病，严重威胁着全球公共卫生。两性霉素 B（AmpB）作为治疗利什曼病的一线药物，却出现了耐药现象，尤其是在泰国，由利什曼原虫（Mundinia）martiniquensis引发的利什曼病，患者在使用 AmpB 治疗后出现了复发情况。然而，目前对于耐药的L. martiniquensis菌株的基因组分析非常有限，这就像在黑暗中摸索，难以找到攻克耐药难题的方向。为了打破这一困境，深入了解耐药机制，研究人员开启了一场探索之旅。

来自多个研究机构的研究人员参与了这项重要研究。他们通过对实验筛选出的 AmpB 耐药的L. martiniquensis（AmpBRP2i）以及从患者分离出的对 AmpB 治疗反应不同的两个菌株 LSCM1-WT（敏感）和 LSCM1-6（耐药）进行比较基因组分析，发现了一些与 AmpB 耐药相关的重要线索。这一研究成果发表在《Current Research in Parasitology 》上，为后续研究提供了关键的方向。

在研究方法上，研究人员主要运用了以下关键技术：首先是全基因组测序（WGS）技术，它就像一把 “基因钥匙”，帮助研究人员打开了菌株基因的大门，获取了基因组的全部信息；其次是利用 Genome Instability Pipeline（GIP）和相关工具进行基因组分析，能够精准地识别出基因的各种变化，如染色体拷贝数变异、基因拷贝数变异以及单核苷酸变异（SNV）等；另外，通过药物敏感性试验，确定了不同菌株对 AmpB 的敏感性差异。

在研究结果方面：

• 菌株对 AmpB 的敏感性：通过实验测定，LSCM1-WT 的 IC₅₀值为 0.052 ± 0.01 μM，而耐药的 LSCM1-6 和 AmpBRP2i 的 IC₅₀值分别为 0.165 ± 0.01 μM 和 0.204 ± 0.01 μM，后两者的 IC₅₀值比 LSCM1-WT 高出近 4 倍，表明它们对 AmpB 具有明显的耐药性。
• 基因组特征：所有L. martiniquensis样本的基因组都由 36 条染色体组成，大小约为 32.4 Mbp，包含 7967 个基因。研究人员对测序数据进行详细分析，了解了每个样本的基因组特征。
• 染色体拷贝数变异：研究发现，不同菌株的染色体非整倍体状态存在差异。比如，染色体 31 在所有样本中都呈现四体状态，而其他染色体在不同菌株中的状态各不相同，有的呈三体，有的呈二体，还有的呈单体，但这些变化与 AmpB 耐药性并没有直接关联。
• 基因拷贝数变异：通过比较归一化测序覆盖度来检测基因 CNV，然而并未发现 “耐 AmpB” 组存在特定的基因 CNV。
• 单核苷酸变异分析：在耐药菌株中发现了一些关键的 SNV。在LSCM1_02556基因（注释为推定的甾醇 C - 24 还原酶基因，C24R）中，出现了提前终止密码子的 SNV，这意味着该基因可能无法表达出有功能的蛋白质，进而影响了 ergosterol 的生物合成途径，导致 AmpB 与 ergosterol 的结合减少，可能是菌株产生耐药性的重要原因。此外，在注释为 “ABC 转运蛋白样 / ABC 转运蛋白家族” 的LSCM1_01856基因中，发现了两个错义 SNV，这暗示该基因可能参与了药物外排机制，与耐药性相关。

在结论和讨论部分，研究表明，在L. martiniquensis对 AmpB 的耐药机制中，C24R基因的突变以及LSCM1_01856基因的变异可能起着关键作用。这一发现意义重大，一方面为进一步研究L. martiniquensis的 AmpB 耐药机制提供了重要的方向，有助于开发更有效的治疗方法；另一方面，这些潜在的耐药标记可以用于分子监测，帮助临床医生及时发现耐药寄生虫，从而调整治疗方案，减少治疗失败和复发的情况，对于利什曼病的防控具有重要的公共卫生意义。但目前的研究只是初步探索，还需要更多的研究和大量的样本验证，才能更深入地了解这些基因变异与耐药性之间的关系，为战胜利什曼病提供更坚实的理论基础和实践指导。