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在猫呼吸道疾病中，FHV-1 和 FCV 共感染常见，传统方法难分离纯 FHV-1。研究人员制备 FCV 多克隆抗体中和共感染样本，成功分离出 FHV-1。该研究为 FCV 共感染样本的分离纯化提供参考，助力相关研究。
在猫咪的世界里，有一种常见又棘手的疾病 —— 猫呼吸道疾病综合征（FRDC，也被简称为猫上呼吸道感染 URI ），它就像一个隐藏在暗处的 “小恶魔”，常常在猫咪密集且压力大的环境中肆虐，是导致猫咪安乐死的重要原因之一。而猫疱疹病毒 1 型（FHV-1）和猫杯状病毒（FCV）则是引发这种疾病的两大 “元凶”，很多感染 FRDC 的猫咪，都是被这两种病毒同时 “盯上”，出现共感染的情况。
FHV-1 感染猫咪后，会让猫咪患上鼻炎和结膜炎，不停地打喷嚏，眼睛和鼻子还会流出浆液性分泌物，有时还会伴随着流口水、精神萎靡、食欲不振和发热等症状；FCV 感染的症状则主要表现为口腔溃疡，还可能伴有轻微的呼吸道和结膜症状。想要彻底了解这些病毒，从感染样本中分离出它们是关键的一步。然而，传统的实验室细胞培养方法却在分离 FHV-1 时遇到了大麻烦。由于 FCV 在感染过程中会持续排出，而且产生细胞病变效应（CPE）的时间比 FHV-1 早，这就严重影响了 FHV-1 在细胞培养中的复制。就算是采用斑块纯化的方法，也很难得到纯净的 FHV-1，这给 FHV-1 的流行病学调查带来了极大的阻碍，让人们难以准确知晓它在临床样本中的真实流行情况。
为了攻克这个难题，鲁东大学生命科学学院等机构的研究人员展开了深入研究。他们另辟蹊径，尝试运用病毒中和的方法来解决 FHV-1 分离困难的问题。经过一系列的实验，研究人员成功获得了 FCV 多克隆抗体，并且用这种抗体对共感染样本进行预处理，经过几轮处理后，彻底中和了样本中的 FCV，大大提高了 FHV-1 的分离成功率，最终成功分离出了 4 株 FHV-1。这项研究成果发表在《BMC Veterinary Research》上，为后续相关研究提供了重要的参考。
在研究过程中，研究人员用到了几种主要的关键技术方法。首先是制备 FCV 多克隆抗体，他们用实验室分离的 FCV 病毒免疫兔子来获取抗体；其次，运用免疫荧光染色技术，通过标记不同颜色的荧光信号，直观地观察 FHV-1 和 FCV 在细胞中的感染情况；另外，还利用定量实时聚合酶链反应（QRT-PCR）来监测病毒含量，根据 Ct 值和病毒拷贝数的线性关系，精确地了解病毒在样本中的变化情况 。
下面来看看具体的研究结果：
- 抗 FCV 抗血清的制备：通过用实验室分离的 FCV 病毒免疫兔子，成功获得了 FCV 多克隆抗体。在免疫后的第 28 天，兔子血清中就检测到了 FCV 抗体，到第 60 天，抗体效价达到最高，分别为 1:128、1:537 和 1:91。
- 共感染样本的分离和鉴定：用共感染病毒的样本感染 CRFK 细胞后，6-24 小时就能观察到细胞病变效应（CPE）。刚开始，细胞的变化符合 FCV 感染的特征，而且随着感染时间增加，这种特征愈发明显，此时 FHV-1 只能检测到少量荧光信号。
- 病毒中和后的分离和鉴定：经过病毒中和处理后，在接种后的 6-24 小时，CRFK 细胞培养物出现了典型的 FHV-1 的 CPE，而且随着感染时间延长，FHV-1 的表达量逐渐增加。
- 定量实时 PCR 检测：研究人员通过 QRT-PCR 监测病毒含量，发现随着中和时间的增加，FHV-1 的含量逐渐上升，而 FCV 的含量则逐渐下降，这表明 FHV-1 成功从共感染细胞培养悬浮液中分离出来。
研究结论和讨论部分指出，FHV-1 和 FCV 是 FRDC 的主要病毒病原体，在临床样本中这两种病毒共感染的情况很常见。以往人们认为在 FCV 和 FHV-1 共感染的样本中，FHV-1 可能因为受到 FCV 的抑制而在后期不表达，但该研究发现 FHV-1 其实是有表达的，只是可能由于 FCV 过早产生 CPE，限制了 FHV-1 在宿主细胞中的表达，具体原因还需要进一步探究。
研究人员还发现，在尝试用斑块纯化法获取纯 FHV-1 时失败了，可能是因为 FCV 增殖速度比 FHV-1 快，抑制了 FHV-1 的细胞病变效应，或者两种病毒共感染 CRFK 细胞时产生的 CPE 相似，难以区分，而且在挑选 FHV-1 斑块时容易混入 FCV 斑块，影响 FHV-1 的复制。
此次研究制备的 FCV 多克隆抗体虽然是针对实验室的一株 FCV，但依然对分离 FHV-1 有很大帮助，尤其在样本珍贵的情况下，该方法具有重要的实际意义。它不仅为从 FCV 共感染样本中分离 FHV-1 提供了有效的方法，而且从理论上讲，也适用于其他 FCV 共感染或污染样本的分离纯化，为后续深入研究这两种病毒以及相关疾病的防治奠定了坚实的基础，有望推动猫类传染病研究领域取得新的进展。
