免疫刺激型溶瘤腺病毒重塑肿瘤微环境增强免疫检查点抑制剂对低免疫原性实体瘤的疗效

本研究针对免疫检查点抑制剂(ICI)单药治疗对低免疫原性实体瘤疗效不佳的问题，通过联合多种免疫刺激型溶瘤腺病毒(如RdB/IL12/GMCSF-RLX)与ICI(抗PD-1/PD-L1/CTLA-4抗体)，系统评估了肿瘤微环境(TME)重塑策略。研究发现，表达IL-12、GM-CSF和松弛素(RLX)的溶瘤腺病毒联合抗PD-1抗体(aPD-1)可显著增强CD8+T细胞浸润和IFN-γ分泌，使"冷肿瘤"转化为"热肿瘤"，在黑色素瘤和胰腺癌模型中实现83.3%的完全缓解率。该研究为克服肿瘤免疫抑制提供了创新性组合治疗方案。

　　

在癌症治疗领域，免疫检查点抑制剂(ICI)虽然为部分患者带来长期生存希望，但面对"冷肿瘤"——那些缺乏免疫细胞浸润且高度免疫抑制的实体瘤时，单药治疗效果往往不尽如人意。这类肿瘤就像配备了"隐身衣"，能巧妙躲避免疫系统的监视。更棘手的是，它们还会构建物理屏障（如致密的细胞外基质）和免疫屏障（如调节性T细胞浸润），形成铜墙铁壁般的防御体系。如何破解这种双重防御机制，成为当前肿瘤免疫治疗的关键科学问题。

汉阳大学的研究团队在《Molecular Medicine》发表的研究中，创新性地将免疫刺激型溶瘤腺病毒与ICI联用，开发出"破壁+激活"的组合拳策略。研究人员构建了5种携带不同免疫调节因子组合的溶瘤腺病毒，包括同时表达IL-12、GM-CSF和松弛素的RdB/IL12/GMCSF-RLX，通过系统比较其与三种ICI(aPD-1、aPD-L1和aCTLA-4)的协同效应，在黑色素瘤（B16-F10）和胰腺癌（HaP-T1）两种典型的低免疫原性肿瘤模型中进行了全面评估。

研究主要采用以下关键技术方法：通过ELISA检测肿瘤组织中IL-12、GM-CSF等细胞因子表达；流式细胞术分析脾脏中CD4⁺/CD8⁺T细胞亚群；IFN-γ ELISpot评估肿瘤特异性免疫反应；免疫组化分析胶原蛋白I/III表达；建立肿瘤再攻击模型评估免疫记忆效应。特别值得注意的是，研究同时使用了小鼠（Ad复制受限）和叙利亚仓鼠（允许Ad复制）模型，从不同角度验证治疗策略的普适性。

治疗性溶瘤腺病毒联合aPD-L1在低免疫原性实体瘤中的疗效
在B16-F10黑色素瘤模型中，所有溶瘤腺病毒与aPD-L1联用组均显示出显著优于单药的效果。其中RdB/IL12/GMCSF-RLX联合治疗组肿瘤体积减少99.5%，83.3%的小鼠达到完全缓解，且长期存活率显著提高。值得注意的是，单纯表达IL-12和VEGF shRNA的病毒(RdB/IL12/shVEGF)也展现出优异疗效，提示抗血管生成与免疫激活具有协同作用。

不同ICI与RdB/IL12/GMCSF-RLX联合效果的比较
头对头比较显示，aPD-1与溶瘤腺病毒的协同效应最为突出，联合组实现100%完全缓解率，且肿瘤复发率最低（16.7%），显著优于aCTLA-4组合（66.7%缓解率）。机制上，aPD-1能更有效地阻断肿瘤局部而非全身的免疫抑制信号，这与溶瘤病毒主要在肿瘤组织发挥作用的特性高度匹配。

联合治疗促进Th1型免疫反应并预防胸腺萎缩
联合治疗组肿瘤中IL-12表达达438±4 pg/mg，IFN-γ水平提升9倍，Th1/Th2细胞因子比值显著升高。更令人惊喜的是，联合治疗完全预防了肿瘤诱导的胸腺萎缩——这一发现为解释其持久的免疫记忆效应提供了重要线索。流式分析显示，治疗组中央记忆T细胞(CD44^highCD62L^high)比例显著增加，特别是CD4⁺记忆亚群。

对复发肿瘤的二次治疗策略
在模拟临床复发的再攻击实验中，即使将病毒剂量降低5倍，aPD-1联合组仍能有效控制二次肿瘤生长。在胰腺癌模型中，表达IL-12和核心蛋白聚糖(DCN)的病毒通过降解胶原蛋白I/III，显著改善了药物渗透和T细胞浸润，使原本"冷"的胰腺肿瘤对ICI治疗产生响应。

这项研究的重要意义在于：首次系统比较了不同免疫刺激因子组合与ICI的协同效应，确立了aPD-1为最优配伍选择；创新性地将ECM重塑（通过RLX或DCN）与免疫激活相结合，破解了物理和免疫双重屏障；在临床转化方面，研究中使用的病毒骨架RdB已进入临床试验阶段，与已获批的PD-1抑制剂联用具有较高的临床可行性。特别值得关注的是，该策略在极具挑战性的胰腺癌模型中也展现疗效，为这类"难治性"肿瘤提供了新的治疗希望。

研究也存在一定局限性：如未能阐明为何aPD-1比aPD-L1效果更优的具体机制；对病毒诱导的PD-L1上调如何影响治疗效果的探讨不够深入。未来研究可进一步优化病毒载体，如尝试将ICI抗体基因直接整合入病毒基因组，或探索与其他免疫调节剂的三联方案。这些发现为开发下一代肿瘤免疫联合疗法提供了重要理论基础和实践指导。