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为探究 EBV 阳性弥漫大 B 细胞淋巴瘤（EBV+DLBCL）肿瘤微环境（TME）对患者生存的影响，研究人员整合 10X Visium 空间转录组学（ST）和单细胞 RNA 测序技术开展研究。结果发现 PD-1/PD-L1 信号通路的关键作用，为 PD-1/PD-L1 阻断疗法提供依据。
在淋巴瘤的大家族里，弥漫大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）是一种常见且棘手的类型。其中，EBV 阳性弥漫大 B 细胞淋巴瘤（EBV+DLBCL）更是因其独特的生物学特性，让治疗充满挑战。以往的化疗方案对它效果有限，患者的预后往往不太理想。这背后的原因之一，就是肿瘤微环境（TME）的高度异质性在作祟。TME 就像是肿瘤细胞的 “帮凶”，它内部各种细胞和分子之间复杂的相互作用，不仅影响着肿瘤的生长，还干扰着治疗的效果。但一直以来，人们对 EBV+DLBCL 的 TME 了解并不深入，这也使得开发针对性的治疗方案困难重重。为了打破这一困境，佛山市第一人民医院的研究人员挺身而出，开启了一项意义重大的研究。
研究人员巧妙地整合了 10X Visium 空间转录组学（ST）和单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）技术。ST 技术能够像 “空间导航仪” 一样，精准定位组织中基因表达的位置信息，scRNA-seq 则能深入单细胞层面，揭示细胞的基因表达特征。二者结合，就可以全面解析 EBV+DLBCL 的 TME 异质性。
研究人员收集了 236 例 DLBCL 患者的样本，从中挑选出 4 例 EBV + 和 4 例 EBV - 的样本进行 ST 分析。在这个过程中，多种技术手段协同发力。通过原位杂交检测 EBV 编码的 mRNA（EBER），判断样本的 EBV 感染状态；利用免疫组化（IHC）检测 PD-L1 的表达；对细胞系进行培养和处理，用 CCK8 实验评估细胞活力，通过流式细胞术检测细胞凋亡，还有 RNA 提取和定量 PCR（qPCR）等技术，从各个角度深入剖析细胞的变化。
在研究结果方面，临床特征分析发现，EBV+DLBCL 患者的预后较差，这更加坚定了研究人员探索 TME 异质性的决心。通过对 ST 数据的聚类分析，发现 EBV+DLBCL 和 EBV-DLBCL 在细胞组成和分布上存在显著差异，EBV 感染明显改变了 TME 的细胞格局。进一步研究 TME 异质性时，研究人员发现 EBV+DLBCL 的免疫反应更为复杂，部分患者处于负免疫调节状态，免疫细胞的监视功能受损。
在众多发现中，PD-1/PD-L1 信号通路脱颖而出。分析差异表达基因发现，该通路在 EBV+DLBCL 中显著上调。通过 IHC 染色和基因表达定位，证实了 PD-1/PD-L1 在 EBV+DLBCL 肿瘤区域高表达，且主要由单核细胞和巨噬细胞（Mo-Macro）调控，而在 EBV-DLBCL 中主要由滤泡辅助性 T 细胞（TFH）调控。
为了探究该通路的功能，研究人员用 PD-1/PD-L1 抑制剂 BMS202 处理细胞系。结果令人惊喜，BMS202 呈剂量依赖性地抑制细胞增殖、促进细胞凋亡，对 EBV+Farage 细胞的作用更为显著。深入挖掘其机制发现，TLR4 作为 PD-1/PD-L1 信号通路的下游效应器，在 EBV + 和 EBV - 细胞中的调控方式截然不同，这为后续精准治疗提供了关键线索。
综合来看，这项研究首次全面分析了 EBV+DLBCL 和 EBV-DLBCL 组织切片的空间基因表达，清晰地描绘出 TME 的复杂景观，揭示了 EBV+DLBCL 预后不良与 TME 异质性、PD-1/PD-L1 通路的紧密联系。这不仅为开发基于 PD-1/PD-L1 抑制剂的个性化治疗方案提供了重要依据，还发现 TLR4 可能是预测治疗反应的潜在生物标志物。不过，研究也存在一些局限性，比如空间转录组学技术的分辨率有限，样本量较小等。但无论如何，这项发表在《Scientific Reports》上的研究成果，为 EBV 驱动的淋巴瘤研究开辟了新方向，有望推动 EBV+DLBCL 的治疗迈向新的台阶，让更多患者受益。
