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恙虫病东方体（Orientia tsutsugamushi，OT）引发的恙虫病威胁全球，尤其在农村地区。标准 PCR 方法难以应用，研究人员开发 RPA-Endo IV-LFD 方法。该方法检测迅速（≤25 分钟）、灵敏度高（检测限≥1 基因拷贝），有望助力资源受限地区诊断恙虫病。
在医疗资源分布不均的当下，恙虫病犹如隐匿在暗处的 “杀手”，悄然威胁着人们的健康。恙虫病由恙虫病东方体（Orientia tsutsugamushi，OT）引起，是一种急性发热性疾病（AFI）。虽说有抗生素可治疗，但早期诊断至关重要，一旦延误，可能引发多器官衰竭、急性脑炎综合征（AES）等严重后果，全球未经治疗的恙虫病患者死亡率中位数达 6.0%，范围在 0 - 70% ，儿童患病后果更为严重。
在全球范围内，恙虫病的影响不容小觑，印度在过去十年就有 18,781 例确诊病例，其中 87.1% 的患者来自农村。然而，分子检测 “金标准” 聚合酶链反应（PCR）因对技术、基础设施和仪器要求高，在偏远农村地区难以施展拳脚。于是，等温扩增（IA）技术应运而生，像重组酶聚合酶扩增（RPA）和环介导等温扩增（LAMP）等，能在 37°C - 65°C 恒温下扩增目标基因，无需复杂仪器。此前研究虽有成果，但仍存在操作繁琐、易交叉污染等问题。
为突破困境，印度医学研究理事会（Indian Council of Medical Research）和印度卫生部下属机构资助的研究人员，展开了一项关于恙虫病东方体检测方法的研究。研究成果发表在《Diagnostic Microbiology and Infectious Disease》上，为恙虫病的诊断带来了新曙光。
研究人员运用了多种关键技术方法。首先，从之前研究的引物对扩增的目标产物中，检索并筛选出保守区域，设计针对 OT 的特异性探针；其次，开发了 RPA - Endo IV - LFD 检测方法，利用核酸内切酶 IV（Endo IV）介导的识别和横向流动检测（LFD）原理，优化检测流程。研究样本来自 AES/AFI 病例全血（WB）样本提取的 DNA。
在研究过程中，研究人员在多个方面取得了重要进展：
- 寡核苷酸序列设计：从 NCBI 获取 OT 菌株的目标产物，用 ClustalW 在 MEGA - X 中进行序列比对，手动筛选保守区域，设计出 Probe1 和 Probe 2 两个探针，以实现 Endo IV 对 OT 的特异性识别。
- 检测方法建立：选取 5 个引物，组成 3 对引物对，靶向 OT 的 56 kDa 基因，结合设计的探针，成功建立 RPA - Endo IV - LFD 检测方法。
- 检测性能评估：该检测平台检测迅速，耗时≤25 分钟。对于 Gilliam 和 Karp 株的 OT，检测限≥1 基因拷贝，临床特异性达 96.9%，灵敏度为 100%。同时，能检测到 Karp 株最低浓度为 91 ag μL-1，Gilliam 株为 3 ag μL-1，且与其他急性发热或急性脑炎综合征相关病原体无交叉反应。
研究结论表明，开发的 RPA - Endo IV - LFD 检测方法具有高灵敏度、快速检测的特点，且结果易于解读。该方法在临床样本检测中展现出良好的应用前景，有望成为即时检测（PoCT）工具，尤其适用于资源受限的偏远地区医疗机构。这一成果意义重大，它为临床医生提供了一种高效的诊断手段，能够帮助他们及时确诊恙虫病病例，进而采取有效的治疗措施，降低患者的死亡率和并发症发生率。同时，该方法操作简便，对操作人员的专业技能要求相对较低，便于在基层医疗机构推广应用，为全球恙虫病防控工作提供了有力支持。
