编辑推荐：
在横纹肌肉瘤（RMS）研究中，MYCN 作用不明。研究人员针对 PAX3::FOXO1 阳性 RMS，探究 MYCN 转录调控及在细胞周期进展中的作用。发现 MYCN 调控关键基因，驱动肿瘤细胞增殖。这为 RMS 治疗提供新靶点，意义重大。
横纹肌肉瘤（RMS）是儿童中较为常见的软组织肉瘤，如同隐藏在孩子身体里的 “小恶魔”，严重威胁着孩子们的健康。它主要分为胚胎型（ERMS）和肺泡型（ARMS）两种组织学亚型，其中多数肺泡型横纹肌肉瘤都与 PAX3::FOXO1 或 PAX7::FOXO1 融合基因有关，这些融合基因就像肿瘤生长的 “助推器”，让癌细胞变得更加凶猛，使得患者的预后情况较差。
MYCN 基因在儿科恶性肿瘤中常常 “兴风作浪”，比如神经母细胞瘤和肺泡型横纹肌肉瘤，它的扩增和高表达与这些肿瘤的发生发展密切相关。在肺泡型横纹肌肉瘤里，MYCN 的转录受到 PAX3::FOXO1 融合蛋白的调控，然而，MYCN 在其中具体扮演着怎样的角色，一直是医学界亟待解开的谜团。为了弄清楚这个问题，来自多个研究机构的研究人员展开了深入的研究，相关成果发表在《EJC Paediatric Oncology》杂志上。
研究人员为了探究 MYCN 在 PAX3::FOXO1 阳性横纹肌肉瘤中的转录调控作用以及它在细胞周期进展中的角色，采用了多种关键技术方法。他们利用染色质免疫沉淀测序（ChIP - seq）技术，寻找 MYCN 在基因组上的结合位点；通过基因本体分析、KEGG 通路分析等方法，研究与 MYCN 结合位点相关基因的功能和参与的信号通路；借助荧光激活细胞分选（FACS）技术分离细胞周期不同阶段的细胞，再结合 Western 印迹技术，检测相关蛋白的表达情况。同时，研究人员还分析了患者样本中的基因表达数据，以确定 MYCN 与其他基因的相关性。
研究结果如下：
- MYCN 结合位点的鉴定：对 RH30 细胞进行 ChIP - seq 分析，研究人员发现多数 MYCN 结合峰位于距离基因转录起始位点（TSS）5 - 50kb 的区域，这表明 MYCN 主要通过增强子区域发挥作用。此外，还鉴定出了与 MYCN 结合峰相关的转录因子结合基序，包括常见的 E - box 基序（CACGTG）和非经典 E - box 基序（CAGCTG），以及与肌肉生成相关的 MYOD 和 MYOG 基序。并且，虽然 MYCN 和 PAX3::FOXO1 相互调控，但它们在 RMS 细胞中主要调控不同的基因。
- MYCN 在细胞周期调控中的作用：对比 MYCN 沉默后的表达谱数据和 ChIP - seq 数据，研究人员找到了 121 个受 MYCN 转录调控且带有其结合位点的基因，其中部分基因正调控，部分负调控，说明 MYCN 在细胞中兼具转录激活和抑制的功能。通过分析患者样本基因表达数据，发现与 MYCN 表达水平相关的基因中，有一部分与 MYCN ChIP - seq 数据重叠，本体分析显示这些基因主要参与细胞周期相关过程和网络，这表明 MYCN 在横纹肌肉瘤细胞周期调控中起着重要作用。
- MYCN 对 CDK4 和 KDM4B 的调控：研究发现，在与 MYCN 表达相关且含其结合位点的基因中，CDK4 和 KDM4B 是重要的细胞周期调控基因。在 RMS 患者样本中，MYCN 与 CDK4、KDM4B 均呈正相关。通过 ChIP - qPCR 和荧光素酶报告实验证实，MYCN 能够结合到 CDK4 和 KDM4B 的启动子区域并调控它们的表达。当在 RH30 细胞中沉默 MYCN 时，CDK4 和 KDM4B 的蛋白表达水平下降。
- MYCN 在细胞周期中的异常表达：通常情况下，MYCN 在神经母细胞瘤细胞周期中会有规律地变化，但在 RMS 细胞中却大不相同。RMS 细胞对血清饥饿和细胞周期同步化试剂不敏感，研究人员利用 FACS 技术分离细胞周期各阶段的 ARMS 细胞后发现，MYCN 在细胞周期的各个阶段均有表达，CDK4 和 KDM4B 也与 MYCN 同时表达，这显示出 MYCN 在 ARMS 细胞中的表达异常。
研究结论和讨论部分指出，该研究揭示了 MYCN 在 PAX3::FOXO1 阳性横纹肌肉瘤中的复杂调控作用。MYCN 不仅调控细胞周期相关基因，还参与神经发生和肌肉生成等发育过程。这意味着 MYCN 不仅是神经母细胞瘤的治疗靶点，对于高风险的融合阳性横纹肌肉瘤同样极具治疗潜力。此外，CDK4 和 KDM4B 作为 MYCN 的直接下游靶点，为横纹肌肉瘤的治疗开辟了新的方向。虽然目前针对 KDM4B 的选择性抑制剂尚未研发成功，但未来可以围绕这些靶点探索新的联合治疗策略，或者直接针对 MYCN 开发基于降解剂的治疗方法，有望为 MYCN 阳性横纹肌肉瘤患者带来新的希望。
