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为解决口腔鳞状细胞癌（OSCC）治疗难题，研究人员开展苦鬼臼毒素（PPT）对 OSCC 细胞作用的研究。结果显示，PPT 抑制 STAT3 通路、诱导 ROS 介导的细胞凋亡。这为口腔癌治疗提供新方向，有望开发新型治疗药物。
口腔鳞状细胞癌（OSCC）是一种常见的恶性肿瘤，在全球各类恶性肿瘤中排名第七。据 GLOBOCAN 2020 报告，全球有 377,713 例新诊断病例和 177,757 例死亡病例，且男性发病率和死亡率更高，预计还会进一步上升。OSCC 的发生与生活方式相关，如过度饮酒、吸烟和免疫缺陷疾病。尽管化疗、放疗和免疫疗法不断进步，但由于发现和诊断较晚，患者预后仍然很差，5 年生存率低至 50%。因此，急需新的治疗药物来改善治疗效果。
在这样的背景下，韩国的研究人员开展了关于苦鬼臼毒素（PPT）对口腔鳞状细胞癌细胞作用的研究，相关成果发表在《Biocell》上。研究表明，PPT 可能通过抑制 STAT3 通路和诱导 ROS 介导的细胞凋亡，成为治疗人类口腔癌的有前景的治疗剂。
研究人员为开展此项研究，主要运用了以下关键技术方法：细胞实验，使用人 OSCC 细胞系（HN22 和 HSC4）；MTT 细胞毒性测定，评估细胞活力；DAPI 染色，观察细胞凋亡形态变化；Annexin V/7-AAD 染色结合流式细胞术，检测细胞凋亡；Western blotting，检测相关蛋白表达；ROS 染色测定，评估细胞内 ROS 水平 。
研究结果如下：
- PPT 抑制 OSCC 细胞增殖：通过 MTT 实验评估 HN22 和 HSC4 细胞活力，发现 PPT 以浓度（125 - 1000 nM）和时间（24 和 48 h）依赖的方式抑制细胞增殖，48 h 处理后，HN22 细胞的半最大抑制浓度（IC50）为 217 nM，HSC4 细胞为 683 nM。同时，PPT 对非肿瘤细胞 HaCaT 的细胞毒性明显低于对 OSCC 细胞的毒性。
- PPT 诱导 OSCC 细胞凋亡并抑制集落形成：利用流式细胞术和 DAPI 染色发现，随着 PPT 浓度增加，早期凋亡细胞数量逐渐增多，细胞核浓缩和 DNA 碎片化更明显。此外，PPT 处理显著降低了 HN22 和 HSC4 细胞的集落形成能力。
- PPT 诱导 OSCC 细胞线粒体功能障碍和 ROS 生成：通过 MitoSOX 分析、TMRM 和 DCFH-DA 实验发现，PPT 处理使细胞内 ROS 水平随浓度增加而升高，同时降低线粒体膜电位，导致线粒体功能障碍和凋亡，且 ROS 水平的升高可被 ROS 清除剂 NAC 预处理所抵消。
- PPT 调节 OSCC 细胞中 STAT3 和凋亡相关蛋白的表达：Western blotting 检测结果显示，PPT 处理显著降低 p-STAT3 水平，且呈剂量和时间依赖性，同时增强凋亡关键标志物 c-PARP 的表达，还调节了抗凋亡蛋白（如 Mcl-1、Bcl-2 和 survivin）和促凋亡蛋白（如 Bax、Bim 和 cleaved caspase-3）的表达。
- NAC、H2O2和 Colivelin 对 PPT 处理的 OSCC 细胞的调节作用：实验表明，NAC 可部分逆转 PPT 导致的 p-STAT3 水平降低；Colivelin 作为 STAT3 激动剂，与 PPT 共同处理可显著降低 p-STAT3 表达；H2O2处理诱导 ROS 产生，且类似 PPT 处理对 STAT3 激活的调节作用，说明 PPT 通过调节 ROS 影响 STAT3 通路诱导细胞凋亡。
研究结论和讨论部分指出，PPT 通过诱导 ROS 生成，抑制 STAT3 激活，调节细胞内促凋亡和抗凋亡蛋白平衡，从而促进口腔鳞癌细胞凋亡，抑制其增殖。不过，该研究仅在体外进行，且局限于两种癌细胞系。未来需要更全面的体内分析和使用多种细胞系及动物模型的研究，以进一步验证研究结果，明确 PPT 在体内的作用机制和疗效。但这项研究仍具有重要意义，首次明确了 PPT 诱导口腔鳞癌细胞死亡的关键分子靶点为 ROS 和 STAT3，为开发新型抗癌疗法提供了实验依据，为口腔癌治疗的进一步探索奠定了基础 。
