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胸膜间皮瘤（PM）治疗手段有限，患者中位生存期短。研究人员探究 BOLD-100 联合常用药物治疗 PM 的效果。结果显示，BOLD-100 与部分药物联合有协同作用。这为 PM 治疗提供新思路，有望改善患者预后。
在医学抗癌研究的漫漫征途中，胸膜间皮瘤（Pleural Mesothelioma，PM）一直是一座难以攻克的险峻山峰。PM 是一种罕见却极具杀伤力的癌症，它悄然盯上人体浆膜表面的胸膜层。罪魁祸首便是石棉纤维，这种在工业领域曾被广泛使用的天然纤维材料，有着出色的物理和电化学绝缘特性。尽管自 20 世纪 80 年代起，全球已有 50 多个国家逐步禁止其生产和使用，但因其漫长的潜伏期，从石棉暴露到肿瘤出现可能长达 20 至 50 年，导致 PM 的发病率依旧不容小觑。
由于 PM 发现时往往已处于局部晚期，这使得大刀阔斧的手术治疗难以施展，全身性治疗成为主要选择。过去约 20 年，以吉西他滨联合卡铂或顺铂加培美曲塞的化疗方案，一直是 PM 一线治疗的 “主力军”，然而其效果却差强人意，患者的中位总生存期仅略超 12 个月。免疫疗法，尤其是免疫检查点抑制剂（ICIs）的出现，给 PM 治疗带来了新曙光。像 Checkmate-743 的 III 期临床试验表明，伊匹木单抗和纳武利尤单抗这两种 ICIs 联合使用，相比传统的培美曲塞和铂类治疗，能显著提高患者的总生存期（中位总生存期分别为 18.1 个月和 14.1 个月，p=0.002 ），特别是对非上皮样亚型效果更为突出。但免疫疗法并非 “万能钥匙”，在许多国家，并非所有患者都能从中受益。而且对于后续治疗，PM 患者也缺乏标准有效的方案。在这样的困境下，探索新的治疗方法迫在眉睫，这便是此次研究的重要使命。
来自意大利皮埃蒙特东方大学（University of Piemonte Orientale）的研究人员 Gregorio Bonsignore、Elia Ranzato 和 Simona Martinotti 勇挑重担，开启了这场意义非凡的研究之旅。他们将目光聚焦在一种名为 BOLD-100 的新型治疗药物上，试图挖掘其在 PM 治疗中的巨大潜力。研究发现，BOLD-100 与部分常用抗癌药物联合使用时，能产生协同作用，显著提高对癌细胞的杀伤力，尤其是在一些难治性细胞系中表现更为突出。这一成果为 PM 患者带来了新希望，意味着未来的治疗方案可能会更加有效，患者的生存质量和生存期有望得到改善。该研究成果发表在《Investigational New Drugs》杂志上。
为了深入探究 BOLD-100 的治疗潜力，研究人员运用了多种关键技术方法。在细胞实验方面，他们选用了多种人类 PM 细胞系，包括从美国典型培养物保藏中心（ATCC）获取的 MSTO-211H 和 MPP89，以及来自意大利医院生物样本库的四个原发性 PM 细胞系。通过蛋白质免疫印迹法（Western blotting analysis）检测 GRP78 蛋白的表达水平；利用钙黄绿素 - AM（calcein-AM）法评估单一药物及药物组合的细胞毒性；采用 JC-1 法测定线粒体膜电位，以此来评估药物对线粒体功能的影响。此外，运用组合指数（Combination Index，CI）计算方法，基于 Chou-Talalay 模型和 Bliss 独立性模型，判断药物联合使用时的相互作用是协同、相加还是拮抗。
下面来详细看看研究结果：
- GRP78 表达：通过蛋白质免疫印迹分析发现，所有被研究的间皮瘤细胞系中 GRP78 的表达，都显著高于非癌性间皮细胞 Met5A。不过，MPP89 细胞系中 GRP78 的表达仅略高于间皮细胞的基线水平。这一结果为后续研究 BOLD-100 的作用机制奠定了基础，因为 BOLD-100 正是通过选择性抑制 GRP78 发挥作用的。
- 细胞活力测定：经过 48 小时的单一药物处理后，PM 细胞呈现出剂量依赖性的反应。研究人员计算出了各药物的EC50值，结果显示，BOLD-100 能使 PM 细胞的存活因子减半，这一结果在双相 PM 细胞系（MSTO-211H）中得到了验证。当 BOLD-100 与单一化疗药物联合使用时，细胞存活因子进一步显著降低。例如，BOLD-100 联合吉西他滨（Gem）、顺铂（cisPt）和长春瑞滨（Vin）处理后，细胞存活因子分别下降约 90%、85% 和 95%。通过计算联合指数（CI）发现，不同细胞系对不同药物组合的反应各异。BOLD-100 与顺铂联合，在所有研究的细胞系中，当效应水平为 0.9 时，都表现出协同作用；BOLD-100 与吉西他滨联合，仅 MSTO-211H、570 和 729 这三个细胞系在效应水平为 0.9 时呈现协同作用；BOLD-100 与长春瑞滨联合，六个细胞系中有四个表现出协同作用。
- 线粒体膜电位测定：线粒体膜电位（ΔΨm）在细胞能量存储过程中起着关键作用。研究人员利用 JC-1 探针标记细胞，通过测量细胞的红色和绿色荧光强度，计算红 / 绿荧光比值来评估线粒体膜电位的变化。结果表明，BOLD-100 会破坏线粒体膜电位，而且联合使用的药物也会对线粒体造成损伤。通过功能性测试评估药物组合的协同活性发现，当采用更功能性的方法并使用 Bliss 独立性模型时，很少出现明显的拮抗作用，更多的是协同作用。
综合研究结果和讨论部分，此次研究意义重大。研究人员首次深入探究了 BOLD-100 与常用抗癌药物联合治疗 PM 的效果，发现了部分组合的协同作用，为 PM 的治疗提供了新的方向和潜在方案。尽管目前的研究数据还不足以将 GRP78 作为 PM 的生物标志物用于临床转化，但对 GRP78 在 PM 中作用的深入了解，无疑为后续研究奠定了坚实基础。此外，以 BOLD-100 为联合药物的多药治疗方法，有望显著提高目前 PM 治疗的疗效。这一研究成果也为未来进一步探索 GRP78 的表达、在组织中的定位，以及其与耐药表型的关系，提供了有力的依据，更为开展 PM 患者的 BOLD-100 临床试验提供了重要的理论支持。相信在科研人员的不断努力下，PM 的治疗将会迎来新的突破，为众多患者带来更多生的希望。
