吴茱萸次碱（RUT）：抑制 TNFR-MAPK/NF-κB 及 NLRP3 炎症小体通路，开启痛风治疗新希望

《Chinese Journal of Integrative Medicine》：Rutaecarpine Attenuates Monosodium Urate Crystal-Induced Gouty Inflammation via Inhibition of TNFR-MAPK/NF-κB and NLRP3 Inflammasome Signaling Pathways

为探究吴茱萸次碱（RUT）对尿酸单钠结晶（MSU）诱导的小鼠腹膜炎的抗炎作用及在脂多糖（LPS）/MSU 诱导的痛风模型中的机制，研究人员开展相关研究。结果显示 RUT 能减轻炎症，抑制相关信号通路，或成痛风潜在治疗药物。

　　目的：探究吴茱萸次碱（Rutaecarpine，RUT）对尿酸单钠结晶（Monosodium Urate Crystal，MSU）诱导的小鼠腹膜炎的抗炎作用，并进一步研究 RUT 在脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）/MSU 诱导的体外痛风模型中的潜在机制。
方法：在 MSU 诱导的小鼠实验中，36 只雄性 C57BL/6 小鼠随机分为 6 组，每组 8 只，包括对照组、模型组、RUT 低剂量组、RUT 中剂量组、RUT 高剂量组和醋酸泼尼松组。各组小鼠连续 7 天每天口服相应药物或赋形剂。通过腹腔注射 MSU 建立痛风炎症模型，以此评估 RUT 的抗痛风炎症效果。随后，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测促炎细胞因子水平，利用流式细胞术检测浸润中性粒细胞细胞因子的比例。在经 LPS/MSU 处理或未处理的 THP-1 巨噬细胞中，借助细胞计数试剂盒 8（Cell Counting Kit 8）观察细胞活力，使用 ELISA 测定促炎细胞因子水平，通过流式细胞术检测细胞焦亡的百分比。分别运用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blot）测定 mRNA 和蛋白质水平，利用激光共聚焦成像观察核因子 κB（NF-κB）p65 的核转位情况。此外，采用表面等离子共振（SPR）和分子对接技术验证 RUT 成分与肿瘤坏死因子 α（TNF-α）靶点的结合能力。
结果：RUT 降低了浸润中性粒细胞和单核细胞的水平，同时减少了促炎细胞因子白细胞介素 1β（IL-1β）和白细胞介素 6（IL-6）的水平（均 P<0.01）。在体外实验中，RUT 降低了 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 的产生。另外，RT-PCR 显示 RUT 对 IL-1β、IL-6、环氧化酶 - 2（Cyclooxygenase-2）和 TNF-α 的 mRNA 水平具有抑制作用（P<0.05 或 P<0.01）。从机制层面来看，RUT 显著降低了巨噬细胞中肿瘤坏死因子受体（TNFR）、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p-MAPK）、磷酸化细胞外信号调节激酶、磷酸化 c-Jun 氨基末端激酶、磷酸化 NF-κB、磷酸化激酶 α/β、NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3（NLRP3）、裂解的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶 - 1 和裂解的 gasdermin D 的蛋白质表达（P<0.05 或 P<0.01）。从分子层面而言，SPR 显示 RUT 与 TNF-α 结合，计算得出的平衡解离常数为 31.7 μmol/L。分子对接进一步证实 RUT 可通过氢键、范德华力和碳氢键与 TNF-α 蛋白直接相互作用。
结论：RUT 减轻了 MSU 诱导的腹膜炎，并抑制了 TNFR1-MAPK/NF-κB 和 NLRP3 炎症小体信号通路，从而减轻 LPS/MSU 诱导的 THP-1 巨噬细胞中的痛风炎症，这表明 RUT 可能是痛风潜在的治疗药物。