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利什曼病和恶丝虫病是重要的新兴人畜共患病。为评估印度喀拉拉邦西高止山脉卡尼部落定居点犬群中利什曼原虫（Leishmania donovani）、“香港恶丝虫”（Dirofilaria sp. “hongkongensis”）和沃尔巴克氏体（Wolbachia spp. ）感染及共感染情况，研究人员检测 75 只犬，发现多种感染及共感染情况，强调防控及检测方法研发的重要性。
在神秘的大自然中，隐藏着许多威胁人类和动物健康的 “小怪兽”—— 寄生虫。利什曼病（Leishmaniasis ）和恶丝虫病（Dirofilariasis）就是其中的代表，它们是新兴的由节肢动物传播的疾病，分别由鞭毛原生动物和丝虫引起。利什曼病是被忽视的热带病，对人类危害极大，印度是内脏利什曼病（Visceral leishmaniasis，VL）负担较重的国家之一，喀拉拉邦也有不少病例。恶丝虫病能让人类患上眼部、皮下甚至肺部疾病，全球病例数不断上升，印度喀拉拉邦更是重灾区。此外，沃尔巴克氏体（Wolbachia ）作为一种与丝虫共生的细菌，也参与其中，影响着疾病的发展。
以往的诊断方法，像显微镜检查和血清学检测，在面对这些寄生虫感染时，存在不少缺陷，比如敏感度和特异性不够高。为了更清楚地了解这些寄生虫在动物中的感染情况，来自印度医学研究理事会媒介控制研究中心（ICMR-Vector Control Research Centre ）的研究人员，针对喀拉拉邦西高止山脉卡尼部落定居点的犬群，开展了一项关于利什曼原虫、“香港恶丝虫” 和沃尔巴克氏体感染及共感染情况的研究，相关成果发表在《Parasitology Research》上。
研究人员为开展这项研究，采用了多种关键技术方法。首先，他们在 2023 年 7 月从 75 只犬身上采集了静脉血样本，涵盖了不同性别、年龄和生活环境的家养犬和流浪犬。接着，运用显微镜检查血涂片，查看是否存在利什曼原虫无鞭毛体和微丝蚴；通过血清学诊断，利用 rK39 快速检测法初步筛查利什曼病抗体。最重要的是，采用分子生物学技术，提取血液样本的基因组 DNA，运用 PCR 技术分别扩增利什曼原虫的动基体 DNA（kDNA）和内转录间隔区 1（ITS1）序列、“香港恶丝虫” 的细胞色素氧化酶亚基 I（COI）基因，以及检测沃尔巴克氏体的 wsp 基因，还对 PCR 产物进行测序和系统发育分析。
下面来看具体的研究结果：
- 显微镜和血清学检查结果：对 75 只犬的血涂片进行吉姆萨染色后发现，28 张涂片中有利什曼原虫无鞭毛体，9 张涂片中有微丝蚴，但微丝蚴难以仅通过形态学确定种类。同时，75 只犬的 rK - 39 快速检测中，23 只呈阳性。
- 分子诊断结果：kDNA - PCR 和 ITS1 PCR 检测显示，75 只犬中有 39 只（52%）感染利什曼病，经 ITS1 RFLP 和测序分析，确定为杜氏利什曼原虫（Leishmania donovani ）。75 只犬中有 19 只（25.3%）的线虫特异性 COI 扩增出现约 720bp 条带，测序证实为 “香港恶丝虫”。在 19 只 “香港恶丝虫” 阳性样本中，14 只（73.6%）沃尔巴克氏体检测呈阳性。此外，75 只犬中有 12 只（16%）同时感染利什曼原虫和 “香港恶丝虫”，9 只（12%）同时感染利什曼原虫、“香港恶丝虫” 和沃尔巴克氏体。
研究结论和讨论部分意义重大。此次研究首次在喀拉拉邦西高止山脉犬群中发现利什曼原虫、“香港恶丝虫” 和沃尔巴克氏体的共感染情况。研究表明，PCR 技术在检测犬利什曼病方面，比传统的显微镜和血清学方法更准确。喀拉拉邦作为利什曼病的新兴热点地区和恶丝虫病的流行地区，犬群中这些寄生虫感染率较高，共感染现象增加了疾病防控的复杂性。而且，多数感染犬无症状，这加大了疾病传播风险。因此，该研究强调了及时干预和预防的重要性，也凸显了继续开发多病原体检测方法的迫切需求，这不仅对疾病流行地区意义重大，对可能出现这些疾病的地区同样关键，有助于更好地保障公共卫生安全。
