抗第三方中枢记忆性否决CD8+T细胞通过下调同种反应性NK细胞DNAM-1受体克服移植排斥的机制研究

这篇开创性研究揭示了抗第三方中枢记忆性否决CD8+T细胞（veto Tcm）通过独特机制克服自然杀伤（NK）细胞介导的骨髓移植排斥。研究发现veto Tcm细胞高表达CD155（PVR）配体，通过Ly49G2/H-2KbMHC I类分子相互作用触发DNAM-1受体内化，经c-Cbl介导的泛素化降解途径诱导NK细胞功能失能。该机制为单倍体相合造血干细胞移植（haplo-HSCT）和现货型CAR-T疗法提供了新策略。

　　

克服NK介导的移植排斥：否决T细胞的创新机制

研究背景
骨髓（BM）同种异体移植面临两大主要障碍：移植物排斥和移植物抗宿主病（GVHD）。传统T细胞去除移植虽降低GVHD风险，却增加了排斥概率。抗第三方中枢记忆性否决CD8⁺T细胞（veto Tcm）的发现为解决这一难题带来了曙光。前期研究已证实这类细胞能通过Fas-FasL机制选择性清除宿主抗供体T细胞克隆，但其对同种反应性自然杀伤（NK）细胞的作用机制仍属未知。

突破性发现：veto Tcm抑制NK介导的排斥
在裸鼠模型中首次证实，B6来源的veto Tcm细胞能显著提高B6-GFP⁺T细胞去除骨髓（TDBM）的嵌合率，效果堪比抗asialo GM1抗体清除NK细胞。值得注意的是，与抗体处理不同，veto Tcm并不减少宿主NK细胞数量，提示其通过功能抑制而非清除发挥作用。流式细胞术分析显示，移植后30天宿主NK细胞与供体细胞可稳定共存。

分子机制解析：从表型到功能
混合淋巴细胞反应（MLR）实验揭示，veto Tcm可显著抑制BALB/c NK细胞增殖（p<0.0001），并使细胞毒性标志物CD107a表达降低83%。特别在具有同种反应性的Ly49G2⁺NK亚群中，CD107a下调更为显著（p=0.0014）。功能实验证实，经veto Tcm处理的NK细胞对H-2K^b靶细胞的杀伤能力完全丧失，即使在20:1的高效靶比下仍无活性。

关键受体DNAM-1的动态调控
深入机制研究发现，veto Tcm诱导NK细胞表面激活受体DNAM-1表达下调72%（p=0.0062）。共聚焦显微镜观察显示，这种下调源于配体触发的内化过程——当BALB/c NK细胞与B6 veto Tcm共培养48小时后，细胞内DNAM-1水平升高3.5倍（p<0.0001）。Transwell实验证实该过程需要细胞直接接触，可被抗Ly49G2或抗H-2K^b抗体阻断（p=0.0046）。

配体-受体相互作用的精确调控
veto Tcm高表达DNAM-1配体CD155（较普通T细胞高8倍，p=0.0015），使用抗CD155抗体可阻断76%的DNAM-1内化（p=0.0008）。有趣的是，可溶性CD155不能诱导内化，说明需要Ly49G2/MHC I类分子相互作用形成的免疫突触来稳定CD155-DNAM-1结合。

Cbl蛋白的关键作用
磷酸化分析发现，c-Cbl在veto Tcm处理的NK细胞中激活程度增加4.2倍（p<0.0001），与DNAM-1内化程度呈线性相关（R²=0.6976）。使用Cbl抑制剂氢化可他宁（50μM）可逆转DNAM-1内化（p=0.0058），恢复NK细胞CD107a表达（p=0.0004）和细胞毒性功能。

研究意义与转化价值
该研究阐明了veto Tcm细胞通过CD155-DNAM-1轴抑制NK细胞功能的新机制，为临床移植提供了重要启示：首先，无需基因编辑即可克服NK介导的排斥；其次，CD155上调策略可能增强移植物存活；最后，这类低GVHD风险、高持久性的veto Tcm细胞是理想的现货型CAR-T载体。目前基于该技术的抗病毒veto Tcm疗法已在MD Anderson癌症中心开展临床试验，初步结果显示出良好的安全性。