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狂犬病是由狂犬病毒（Rabies virus）引起的致命性疾病，暴露后预防（PEP）需使用狂犬病免疫球蛋白（RIG），但现有 RIG 供应存在诸多问题。研究人员以母鸡为对象，开展鸡卵黄源 IgY 制备研究。结果显示 PEG 法提取效果好，IgY 有中和活性，有望替代马源 RIG。
狂犬病，这个听起来就让人胆寒的疾病，是由狂犬病毒引发的。一旦发病，在未接种疫苗的人群中，几乎必死无疑。在发达国家，家养动物的狂犬病控制得相对较好，但在东南亚和非洲等许多地区，它依旧是严重威胁公众健康的 “恶魔”，每年约导致 59000 人死亡。
目前，暴露后预防是防止狂犬病死亡的有效手段，其中狂犬病免疫球蛋白（RIG）起着关键作用，它能在伤口部位提供被动抗体保护。然而，全球获取 RIG 面临重大挑战。人源 RIG 价格高昂，很多患者难以负担；马源 RIG 不仅生产成本高，还存在伦理问题以及可能引发不良反应。2020 年泰国爆发的非洲马瘟（AHS）更是让马源 RIG 的供应雪上加霜，凸显了现有 RIG 生产系统的脆弱性。
为了解决这些难题，来自泰国玛希隆大学（Mahidol University）等机构的研究人员展开了一项重要研究，旨在探索利用鸡卵黄源免疫球蛋白 Y（IgY）作为马源 RIG 的替代物用于狂犬病治疗的潜力。该研究成果发表在《Biotechnology Reports》上，为狂犬病防治带来了新希望。
研究人员用到的主要关键技术方法有：首先，选取 6 只 18 周龄的白来航蛋鸡，在其 24 周龄时开始用狂犬病疫苗免疫，通过多次免疫刺激母鸡产生针对狂犬病毒的抗体。免疫后收集鸡蛋，采用多种方法提取 IgY，如聚乙二醇 6000（PEG）沉淀法、辛酸（CA）沉淀法和硫酸铵（AS）沉淀法，并通过 Bradford 法测定蛋白质浓度。之后，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测 IgY 与狂犬病毒糖蛋白的免疫反应性，通过 SDS-PAGE 和 Western blot 分析 IgY 的纯度和特性，采用亲和色谱和超滤等方法对 IgY 进行纯化，借助 1D GeLC-MS/MS 分析鉴定蛋白质，运用鸡 IgY ELISA Kit 测定 IgY 浓度，使用快速荧光灶抑制试验（RFFIT）评估 IgY 的中和活性 。
研究结果如下：
- 时间进程抗体产生：ELISA 检测发现，免疫后 IgY 结合活性逐渐上升，免疫 6 次后持续保持较高水平，免疫 10 次（免疫后第 19 周）时活性最高，之后开始下降。这表明随着免疫次数增加，母鸡产生的针对狂犬病毒糖蛋白的抗体增多，达到一定次数后抗体水平开始回落。
- IgY 提取方法的纯度比较：通过 SDS-PAGE 分析，发现 CA 法提取的总蛋白量最高，但 IgY 纯度最低；PEG 法和 AS 法的 IgY 纯度相近，不过 PEG 法每毫升蛋黄提取的 IgY 产量最高。综合来看，PEG 法在提取 IgY 方面更具优势。
- IgY 的纯化：利用 IgY 亲和色谱对 PEG 提取的粗 IgY 进行纯化，能有效去除杂质蛋白，使 IgY 纯度提高到 95%，经 1D GeLC-MS/MS 分析，纯化后的 IgY 中免疫球蛋白含量高达 98%。
- 分子重量分布：通过尺寸排阻色谱（SEC）分析，纯化后的 IgY 在保留时间 61.22 分钟处出现主要峰，峰面积约占总面积的 95%，表明纯化效果良好，IgY 聚集程度低。
- 狂犬病 IgY 中和试验：RFFIT 评估显示，PEG 法提取的粗 IgY 中和活性最高，纯化后的 IgY 中和活性进一步提高。计算得出，生产 1 瓶 1000 IU/vial 效力的 RIG，PEG 法提取的 IgY 仅需约 8 个鸡蛋，效率远高于其他方法。
研究结论和讨论部分指出，蛋鸡是生产 IgY 的优质来源，用其生产抗狂犬病 IgY 具有成本效益高、非侵入性、易规模化等优点。PEG 法提取 IgY 产量和纯度较高，但大规模生产仍面临挑战，如优化提取和纯化方法、确保批间一致性、考虑动物伦理等 。不过，IgY 作为狂犬病治疗的潜在替代物展现出了巨大潜力，一旦解决这些问题，有望为狂犬病防治提供更有效的手段，改变当前 RIG 供应困境，拯救更多生命，推动狂犬病防治领域的重大变革。
