灵芝中抑制脂质积累的三萜类化合物发现及其构效关系研究

本研究从栽培灵芝子实体中分离出8种新型羊毛脂烷型三萜(1–8)和27种已知类似物(9–35)，通过光谱技术解析结构，发现ganosinenic acids D/E(1–2)具有罕见的五环四元碳环结构。针对OA诱导的HepG2细胞模型，发现ganolucidic acid G(7)、lucidenic acid N(9)等化合物可剂量依赖性抑制脂质积累，首次揭示侧链降解的C27 nor-三萜比C24/C30类似物更具活性，为抗代谢综合征药物研发提供新候选分子。

　　

随着全球代谢性疾病发病率持续攀升，寻找安全有效的天然活性成分成为研究热点。灵芝作为传统药用真菌，其富含的三萜类化合物（triterpenoids）被认为具有调节脂代谢的潜力，但具体活性成分及其作用机制尚不明确。尤其对于栽培灵芝中结构新颖的三萜类物质，其抑制脂质积累（lipid accumulation）的活性谱系和构效关系（SAR）仍缺乏系统研究。

中国的研究团队通过系统化学分离与活性筛选，从栽培灵芝子实体中获得35个三萜类化合物，包括8个结构新颖的羊毛脂烷型（lanostane-type）三萜。研究采用核磁共振（NMR）、质谱（MS）等光谱技术解析结构，发现ganosinenic acids D(1)和E(2)具有突破性的五环四元碳环骨架，打破了传统三萜五元/六元环主导的结构认知。在建立油酸（OA）诱导的HepG2细胞脂肪变性模型基础上，通过油红O染色定量分析，首次证实lucidenic acid N(9)在10 μM浓度下可使脂滴减少42.7%，且呈现明确的剂量-效应关系。更值得注意的是，研究通过对比C₂₄、C₂₇和C₃₀三萜的活性差异，发现侧链降解形成的C₂₇ nor-三萜（如化合物9）普遍表现出更强的活性，这一发现为定向结构修饰提供了重要依据。

关键技术包括：1）采用硅胶柱层析和HPLC定向分离活性成分；2）综合运用1D/2D NMR和HR-ESI-MS进行结构鉴定；3）建立OA诱导的HepG2细胞脂肪变性模型；4）通过油红O染色结合图像分析定量脂质积累。

【结构解析】发现两个罕见五环四元碳环三萜ganosinenic acids D/E，通过HMBC和¹H-¹H COSY谱确定其D环为环丁烷结构。
【活性筛选】在35个化合物中，ganolucidic acid G(7)和lucidenic acid N(9)分别使细胞内甘油三酯（TG）水平降低31.5%和48.2%。
【机制探索】构效分析表明C-20位羧基和Δ²⁴⁽²⁵⁾双键是维持活性的关键基团，而C-23位甲基化会显著削弱活性。

该研究不仅丰富了天然产物的结构多样性库，更通过精准的构效分析指明：1）四元环结构的引入可能增强三萜膜穿透能力；2）侧链降解产生的C₂₇骨架更利于与脂代谢靶点结合。这些发现发表于《Fitoterapia》，为开发基于灵芝三萜的抗脂肪肝药物提供了既符合传统用药经验又具有现代科学依据的先导化合物，同时为天然产物结构改造提供了新的方向性指引。