鲤疱疹病毒2型ORF67通过竞争性阻断STING磷酸化抑制干扰素表达的分子机制

本研究针对鲤疱疹病毒2型（CyHV-2）如何逃逸鱼类干扰素（IFN）抗病毒免疫的关键科学问题，揭示了其开放阅读框ORF67通过结合TBK1并竞争性阻断STING磷酸化，从而抑制宿主IFN表达的分子机制。研究人员通过Co-IP、体外磷酸化实验及细胞病变效应分析，证实ORF67通过干扰STING-TBK1信号通路促进病毒复制。该研究为理解CyHV-2的免疫逃逸策略提供了新视角，并为鱼类病毒性疾病的防治提供了理论依据。

　　

研究背景与意义
鲤疱疹病毒2型（CyHV-2）是导致鲫鱼造血器官坏死病的病原体，对水产养殖业造成重大经济损失。尽管干扰素（IFN）是鱼类抵御病毒的核心防线，但CyHV-2能有效逃逸宿主免疫，其机制尚不明确。此前研究发现，CyHV-2的激酶样蛋白（KLP）可通过降解STING抑制IFN产生，但病毒可能采用多途径逃避免疫。因此，解析CyHV-2的其他免疫逃逸机制对疾病防控至关重要。

研究机构与目标
中国科学院相关团队聚焦CyHV-2的ORF67蛋白，探究其是否通过干扰STING-TBK1信号通路抑制IFN表达。研究结合分子互作、功能实验及病毒学分析，揭示了ORF67的作用机制。

关键技术方法

1. 分子互作分析：通过共免疫沉淀（Co-IP）验证ORF67与TBK1的结合；
2. 磷酸化调控实验：体外磷酸化实验证实ORF67阻断STING磷酸化；
3. 功能验证：利用细胞病变效应（CPE）和免疫印迹分析ORF67对细胞抗病毒功能的影响；
4. 样本来源：实验采用鲫鱼来源的GiCB细胞系及实验室分离的CyHV-2毒株。

研究结果

1. ORF67抑制IFN诱导并促进病毒复制

   • 荧光素酶报告实验筛选发现ORF67显著抑制IFN启动子活性；
   • 过表达ORF67的细胞中，CyHV-2复制效率显著提升。

2. ORF67靶向STING-TBK1信号通路

   • Co-IP证实ORF67直接结合TBK1的A/B结构域；
   • 体外实验显示ORF67竞争性阻断TBK1对STING的磷酸化，抑制IRF3激活。

3. ORF67削弱细胞抗病毒功能

   • CPE实验表明ORF67表达加剧病毒致细胞病变；
   • 免疫印迹显示ORF67下调IFN及其下游效应分子表达。

结论与讨论
该研究首次阐明CyHV-2 ORF67通过“劫持”TBK1、阻断STING磷酸化的免疫逃逸新机制，补充了病毒多靶点干扰宿主防御的理论框架。其意义在于：

1. 理论层面：揭示DNA病毒逃逸鱼类RLR通路（RIG-I-like receptor pathway）的独特策略；
2. 应用价值：为开发靶向STING-TBK1通路的抗病毒制剂提供新靶点，如设计竞争性多肽抑制剂。

研究局限性在于未解析ORF67的结构域功能，未来需结合突变体实验进一步验证。论文发表于《Fish》，为水产病毒免疫学领域的重要进展。