新型SCAR标记技术精准鉴别有毒绿褶菇与球盖菇及其在食品安全中的应用

本研究针对有毒绿褶菇（Chlorophyllum molybdites）和球盖菇（C. globosum）易与可食用蘑菇混淆导致中毒的问题，开发了特异性SCAR（序列特征扩增区域）分子标记。通过HAT-RAPD（高退火温度随机扩增多态性DNA）技术和多重PCR（聚合酶链式反应），成功获得288 bp和183 bp的物种特异性标记，灵敏度达3 pg/μL，并可检测烹饪后样品中1%的有毒成分。该技术为蘑菇中毒的快速诊断提供了可靠工具，对预防食源性疾病具有重要意义。

　　

在野外采摘蘑菇的传统饮食文化中，误食有毒蘑菇导致的中毒事件屡见不鲜。其中，绿褶菇（Chlorophyllum molybdites）和球盖菇（C. globosum）因形态与可食用的Macrolepiota属蘑菇极为相似，常被混淆。这两种有毒蘑菇含有热稳定性毒素，误食后会引起恶心、呕吐、血便等严重胃肠道症状，甚至导致脱水或死亡。尽管孢子颜色可作为鉴别特征，但仅成熟期可见，且形态学鉴定依赖专业经验。随着分子生物学技术的发展，DNA标记为物种鉴定提供了新思路，但现有方法在灵敏度、特异性或操作便捷性上存在局限。

为应对这一挑战，来自中国的研究团队在《Food Chemistry: Molecular Sciences》发表论文，开发了基于SCAR标记的快速检测技术。研究首先通过ITS（内转录间隔区）系统发育分析确认了35份样本的分类地位，随后利用HAT-RAPD技术筛选出9个物种特异性DNA片段，并设计出可分别扩增288 bp（绿褶菇）和183 bp（球盖菇）的SCAR引物。通过多重PCR验证，该技术不仅能区分混合样本中的有毒成分，还能检测经烹饪处理的降解DNA，灵敏度达3 pg/μL。

主要技术方法
研究团队从泰国多地采集35份蘑菇样本，经形态学和ITS序列分析确认物种。通过HAT-RAPD技术筛选特异性片段并克隆测序，设计SCAR引物后，采用单重和多重PCR验证标记特异性。灵敏度测试采用10倍梯度稀释DNA模板，并模拟烹饪消化过程评估方法稳定性。

研究结果

1. 样本分类与系统发育分析
   ITS序列构建的最大似然树将样本分为Chlorophyllum和Macrolepiota属的不同分支，支持率≥70%，明确了两类有毒物种的系统发育位置。

2. HAT-RAPD片段筛选
   30个随机引物中，NAPS329引物扩增出绿褶菇（300 bp）和球盖菇（200 bp）的特异性片段，为SCAR标记开发奠定基础。

3. SCAR标记验证
   设计的引物Cmol-F/R和Cglob-F/R仅在目标物种中扩增出288 bp和183 bp条带，非目标物种无交叉反应，内部对照LSU rDNA（1100 bp）确保实验可靠性。

4. 多重PCR与灵敏度测试
   同步检测两种有毒物种时，多重PCR的检测限为30 pg/μL。单重PCR灵敏度更高（3 pg/μL），且能在含1%有毒成分的烹饪样品中检出目标DNA。

结论与意义
该研究建立的SCAR标记技术兼具高特异性和灵敏度，突破了传统形态鉴定的局限性。其多重PCR体系可一次性筛查两种有毒物种，适用于临床样本和食品残留检测。尤其对烹饪后降解DNA的检出能力，为中毒事件溯源提供了实用工具。未来若扩大样本多样性验证，将进一步增强该技术的普适性，为全球蘑菇中毒防控提供分子层面的解决方案。