LAMP 技术：精准狙击油用牡丹红斑病的 “利器”

为解决油用牡丹产业发展中红斑病（由 Cladosporium paeoniae 引起）威胁生产的问题，研究人员开展了基于环介导等温扩增（LAMP）技术检测该病的研究。确定了最优反应体系，其灵敏度高、特异性强，能用于田间检测，为病害防控提供保障。

　　木本油料作物产业已成为中国解决粮油危机的国家战略。油用牡丹作为木本油料作物之一，其发展受到越来越多的关注。病虫害逐渐成为油用牡丹产业发展中必须考虑的因素，尤其是由芍药枝孢菌（Cladosporium paeoniae）引起的红斑病，对油用牡丹的生产构成了最大威胁。准确及时的病害诊断在病害防控中起着重要作用。环介导等温聚合酶链式反应（Loop-mediated isothermal PCR，LAMP）在植物病害检测中应用越来越广泛。本文基于芍药枝孢菌低同源性的内转录间隔区（ITS）序列设计 LAMP 引物，优化反应成分和条件，确定了最佳 LAMP 反应体系：10×ThermoPol Buffer 2.5 μL、Bst DNA 聚合酶 0.16 U/μL、F3/B3 0.2 μmol/L、dNTP 1.2 mmol/L、MgSO₄ 8 mmol/L、FIP/BIP 1.6 μmol/L、羟基萘酚蓝（HNB）0.15 mmol/L、甜菜碱 0.6 mol/L、DNA 1 μL，加 ddH₂O 至 25 μL；反应温度设定为 64°C，最短反应时间为 60 分钟 。该 LAMP 检测系统灵敏度高，是传统聚合酶链式反应（PCR）检测的 100 倍；而且具有特异性，仅对芍药枝孢菌呈阳性反应，对油用牡丹其他叶部致病真菌无反应。根据 LAMP 反应后 PCR 管的颜色变化和 2% 琼脂糖凝胶电泳图上的条带，可判断是否感染红斑病。LAMP 检测结果与病原菌分离结果一致，表明 LAMP 可应用于田间油用牡丹红斑病的检测。该 LAMP 反应系统在四个油用牡丹种植基地进一步得到验证，可用于诊断油用牡丹红斑病，为生产中精准防控该病提供了切实保障。