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甲醇营养型酵母毕赤酵母（P. pastoris）以甲醇驱动蛋白合成潜力巨大，但甲醇代谢产生的甲醛阻碍其生物转化。研究人员敲除酒精氧化酶基因（aox1和aox2）并添加甘油共底物。优化条件下，ΔAOX1/2 菌株生物量和 EGFP 荧光强度显著提升。该策略可缓解代谢压力、提高蛋白产量。
甲醇营养型酵母毕赤酵母（
Pichia pastoris，
P. pastoris）在利用甲醇驱动蛋白质生物合成方面展现出卓越能力，使其成为利用甲醇作为可再生原料进行碳中和生物制造的理想平台。然而，甲醇代谢带来的难题，尤其是有毒的甲醛中间产物积累，严重阻碍了甲醇的高效生物转化。
为克服这一限制，研究采用了一种代谢工程策略，即同时敲除酒精氧化酶基因（aox1和aox2），并补充甘油作为共底物。以增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）作为模型异源产物，研究发现，ΔAOX1/2 菌株在甘油 - 甲醇共喂养培养中实现了更高的蛋白质生产效率。在优化条件（0.5% 甲醇 + 0.4% 甘油）下，工程菌株的生物量密度达到 38.5（OD600），EGFP 荧光强度为 494,723 单位，与仅用 1% 甲醇培养的野生型（wild - type，WT）菌株相比，分别提高了 32.8% 和 53.6% 。
转录组分析显示，蛋白质合成的增强源于甲醇利用的优化，这得益于同化和异化代谢模块的协同上调。该研究表明，抑制酒精氧化酶并结合甘油共代谢，是缓解毕赤酵母中甲醇代谢压力、提高异源蛋白产量的有效策略。
