《Journal of Clinical Microbiology》：Alternative treponemal serology assays for diagnosis and confirmation of syphilis in a diagnostic laboratory: a retrospective evaluation of four agglutination assays and one ELISA
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这篇研究评估了多种替代梅毒螺旋体（Treponema pallidum）颗粒凝集试验（TPPA）的血清学检测方法，包括 3 种梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）和 1 种酶联免疫吸附试验（ELISA）。结果显示，TPHA 在临床和分析性能上表现出色，可作为 TPPA 的可接受替代方案。
研究背景
梅毒是由梅毒螺旋体（Treponema pallidum）亚种苍白亚种引起的性传播感染。近年来，全球梅毒发病率显著上升，包括先天性梅毒，导致了大量的发病和新生儿死亡。血清学检测是梅毒诊断的主要方法，而梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）曾是国际指南中确认梅毒螺旋体检测的首选方法。但由于监管限制，TPPA 在欧洲、澳大利亚等地区已被撤回，且全球仅有一家 TPPA 制造商，供应链存在潜在风险。因此，急需评估替代检测方法和诊断算法。
材料和方法
- 临床验证
- 研究概述：本研究分为两部分，一是评估市售的替代梅毒螺旋体抗体检测方法；二是评估当地唯一获批使用的梅毒螺旋体凝集试验，使用临床血清和血浆样本，并补充质量保证样本、交叉反应样本和评估检测精密度。
- 研究地点和临床样本：在澳大利亚墨尔本的维多利亚传染病参考实验室（VIDRL）进行回顾性实验室评估，临床样本来自墨尔本性健康中心（MSHC）和莫纳什健康（MH）。研究人群为 18 岁及以上进行梅毒血清学检测的成年人，共纳入 300 例临床样本（120 例 TPPA 反应性和 180 例 TPPA 非反应性）。收集患者的相关数据，包括性别、年龄、HIV 状态等，并根据临床标准对梅毒进行分期。
- 血清学检测：从 - 20°C 储存中取出剩余样本，解冻后使用替代梅毒螺旋体血清学检测方法进行检测，包括 3 种 TPHA（Fortress、Randox、Arlington）和 1 种梅毒螺旋体 ELISA（Euroimmun Anti-T. pallidum IgG ELISA），按照制造商的使用说明进行操作和结果判读。
- 数据分析：主要评估指标为各替代检测方法与 TPPA 相比的性能特征，包括阳性百分比一致性（PPA）、阴性百分比一致性（NPA）、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）。对不一致结果进行进一步调查，并进行亚组分析。
- NewBio TPHA 检测的详细实验室评估：NewBio TPHA 是澳大利亚临床实验室唯一获批使用的检测方法。对其进行详细评估，包括使用不同类型的样本（临床血清、血浆、质量保证样本、交叉反应样本）进行检测，评估其与 TPPA 相比的性能特征、重复性、再现性和交叉反应性。
- 统计方法：使用卡方检验和 Fisher 精确检验等方法计算各项性能指标及其 95% 置信区间，使用相关统计检验评估临床队列间的人口统计学差异。
结果
- 数据集特征：纳入评估的 300 例患者中位年龄为 33 岁，71.0% 为男性，15.3% 感染 HIV，5.0% 为孕妇。样本主要来自性健康诊所。24.0% 的患者临床诊断为活动性未经治疗的梅毒感染，25.0% 有既往治疗梅毒史，50.7% 无梅毒。120 例样本 TPPA 反应性，180 例样本 TPPA 非反应性。
- 市售替代梅毒螺旋体检测方法的性能特征：与 TPPA 相比，Arlington、Fortress 和 Randox TPHA 的 PPA 分别为 99.2%、100%、99.2%，Euroimmun IgG ELISA 的 PPA 为 93.3%；各 TPHA 的 NPA 为 97.8%，Euroimmun IgG ELISA 的 NPA 为 98.9%。在与临床梅毒状态（活动性未经治疗的梅毒与无梅毒）比较时，Arlington 和 Fortress TPHAs 的灵敏度与 TPPA 相当，均为 97.2%，特异性为 99.3%。不同检测方法在不同临床梅毒分期的灵敏度存在差异，在检测既往梅毒方面，Euroimmun IgG ELISA 的持续反应性结果最少。
- NewBio TPHA 的详细实验室评估：共纳入 342 例样本进行 NewBio TPHA 评估。其与 TPPA 相比，在临床血清、血浆、质量保证样本和交叉反应样本中的 PPA 总体为 100%，NPA 为 97.4%。该检测方法在重复性、再现性和不同检测人员间的一致性方面表现良好，仅有少量样本结果为不确定。
讨论
研究表明，多种市售 TPHA 的分析性能特征与 TPPA 相当。与活动性未经治疗的梅毒状态相比，部分 TPHA 的灵敏度与 TPPA 相同，特异性大于 99%。而梅毒螺旋体 IgG ELISA 与 TPPA 相比，PPA 和临床灵敏度均低于 95%。NewBio TPHA 在不同样本类型中的表现优秀，且可能通过修改检测方案提高实验室效率。本研究存在一些局限性，如样本存储条件、回顾性研究设计等。但总体而言，TPHA 可作为 TPPA 的可接受替代方案，对新检测方法进行高质量的独立实验室评估十分重要。
