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在癌症治疗研究中，小分子 NPB 曾被报道可抑制 BAD 蛋白磷酸化诱导癌细胞凋亡。研究人员重复相关实验，发现 NPB 既不抑制 BADS99磷酸化，也不诱导癌细胞死亡，且会形成胶体聚集体。该结果为重新评估 NPB 的抗癌机制提供依据。
在癌症治疗的广阔领域中，诱导癌细胞凋亡一直是临床肿瘤学的关键目标。其中，一种名为 NPB 的小分子曾备受瞩目。此前有研究宣称，NPB 能通过抑制促凋亡蛋白 BAD（BCL-2-associated agonist of cell death protein BAD，仅 BH3 结构域的细胞死亡蛋白，在细胞凋亡过程中发挥关键作用 ）的磷酸化，特异性地诱导癌细胞死亡，这一发现仿佛为癌症治疗点亮了一盏新的希望之灯。然而，事实真的如此吗？
为了探寻真相，来自加拿大阿尔伯塔大学（University of Alberta）的研究人员开展了一项深入研究。他们决定重复此前关于 NPB 的研究，旨在验证 NPB 是否真的具备抑制 BAD 磷酸化并诱导癌细胞死亡的能力。这项研究意义重大，如果 NPB 的抗癌效果得到证实，将为癌症治疗带来新的策略和药物选择；反之，若结果并非如此，也能让科研人员重新审视相关研究方向，避免在错误的道路上继续探索。最终，该研究成果发表在《Communications Medicine》上。
研究人员在此次研究中，运用了多种关键技术方法。细胞培养技术用于培养多种乳腺癌和卵巢癌细胞系，为后续实验提供细胞样本；Western blotting 技术（蛋白质免疫印迹技术，可用于检测蛋白质的表达水平和磷酸化状态 ）被用来分析 BAD 蛋白的磷酸化情况；Alamar blue assay（一种细胞活力检测方法，通过检测细胞代谢活性来反映细胞的存活状态 ）则用于评估 NPB 对细胞活力的影响；此外，还利用了核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）和质谱技术来鉴定 NPB 的结构和纯度，以及动态光散射（Dynamic Light Scattering，DLS）和电子显微镜技术观察 NPB 在溶液中的聚集状态。
NPB 对 BAD 磷酸化及细胞活力的影响
研究人员首先对购买的 NPB 进行了结构和纯度确认，通过质谱和 NMR 技术，证实其为预期的纯净化合物。随后，他们采用与原始研究相同的乳腺癌细胞系、处理条件和检测方法，来验证 NPB 对 BADS99磷酸化的抑制作用。然而，结果令人意外，NPB 并没有降低 BADS99的磷酸化水平。在细胞活力实验中，用 NPB 处理的乳腺癌和卵巢癌细胞，其存活率与对照组（用二甲基亚砜 DMSO 处理）相似，与原始研究中报道的能显著降低癌细胞活力的结果不符。即使在高浓度 NPB 处理下，部分细胞系出现活力下降，但此时 NPB 已出现不溶性，溶液产生浑浊，这表明细胞活力的变化并非是 NPB 通过抑制 BAD 磷酸化导致的。
NPB 形成胶体聚集体
研究人员进一步发现，NPB 在溶液中会形成胶体聚集体。通过动态光散射技术检测，发现 NPB 的平均粒径随着浓度增加而增大，临界聚集浓度约为 0.1μM。电子显微镜观察也证实了 NPB 在不同浓度下会形成纤维结构、胶体和胶体聚集体。由于 NPB 在报道的抑制 BAD 磷酸化和诱导凋亡的工作浓度下就会形成聚集体，这意味着其发挥作用的机制并非如原始研究提出的那样，通过结合细胞内的 BAD 蛋白来发挥作用。
综合上述研究结果，研究人员得出结论：NPB 对乳腺癌和卵巢癌细胞系并无细胞毒性，也不会影响 BAD 蛋白的磷酸化。而且，NPB 在远低于原始研究报道的半数抑制浓度（IC50）时就会形成胶体聚集体，这对之前报道的数据解释提出了挑战。这表明，NPB 不太可能通过结合并抑制细胞内 BAD 磷酸化来激活细胞凋亡程序。此次研究意义非凡，它为重新评估 NPB 作为 BAD 抑制剂诱导癌细胞凋亡的前景提供了重要依据，提醒科研人员在进一步研究 NPB 或类似化合物时，必须充分考虑这些相互矛盾的数据以及 NPB 聚集带来的影响，避免被错误的研究结果误导，为后续更准确、更有效的癌症治疗研究指明了方向。
