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葫芦巴碱（Trigonelline）在医药领域应用渐广，但现有分析方法存在缺陷。研究人员开发并验证一种 HPLC 法测定其含量。结果显示该方法线性范围优、精度高。此研究为葫芦巴碱分析及相关产品质量评估提供技术支持。
在生命科学和健康医学领域，葫芦巴碱（Trigonelline）是一种备受瞩目的天然产物。它主要存在于葫芦巴（Trigonella foenum - graecum）种子等多种植物中，展现出多种令人期待的药理活性，比如抗糖尿病、抗氧化、抗炎等作用 ，在药物研发和质量控制方面有着广阔的应用前景。然而，目前准确测定葫芦巴碱含量的方法却面临诸多挑战。
以往报道的分析方法，像紫外 - 可见光谱法（UV），虽然操作简单、速度快，可一旦遇到复杂样品，就极易受到干扰，导致结果不准确；薄层色谱法（TLC）和高效薄层色谱法（HPTLC）分辨率虽好，但灵敏度偏低，重复性也差；气相色谱（GC）和气相色谱 - 质谱联用（GC - MS）在分析挥发性化合物时很有效，可葫芦巴碱高沸点、低热稳定性的特性，使得直接用这些方法分析困难重重；核磁共振（NMR）和超高效液相色谱 - 串联质谱（UPLC - MS/MS）虽准确度和灵敏度高，可高昂的成本和复杂的操作，限制了它们在常规实验室的使用。即便常用的反相色谱法，也因葫芦巴碱分子含极性官能团，存在保留时间短、分离效果不佳的问题。为了突破这些瓶颈，让葫芦巴碱在医药领域更好地发挥作用，国内研究人员开展了一项关键研究。
研究人员的目标很明确，就是要开发并验证一种高效的高效液相色谱（HPLC）方法，实现对葫芦巴碱的精准定性和定量分析。他们通过全面、系统地查阅 2015 - 2024 年的相关文献，对不同的分析方法进行深入研究和对比。在此基础上，利用实验室现有资源，对色谱条件进行精细优化，包括调整流动相组成、筛选合适的色谱柱、确定最佳的洗脱方式等。最终，成功开发出一种以大连依利特 Hypersil NH2色谱柱为核心的 HPLC 分析方法。
在研究过程中，研究人员用到了多种关键技术方法。首先是文献综述法，他们借助 Web of Science、PubMed 等学术平台，查阅大量文献，梳理分析现有方法的优缺点，为新方法的开发提供思路。其次是实验法，通过制备不同浓度的标准溶液和样品，利用 Shimadzu LC - 20 HPLC 系统进行分析，对方法的各项性能指标进行评估。在样品处理上，对葫芦巴种子粉末进行脱脂、超声提取、浓缩等操作，确保样品的纯净和代表性。
研究结果令人欣喜。在系统适用性方面，多次重复进样的结果显示，保留时间、拖尾因子、理论塔板数和峰面积的相对标准偏差（RSD）均低于 2%，拖尾因子在 0.970 - 0.982 之间，理论塔板数在 13143 - 13281 之间，表明该方法稳定性好、分离效率高。线性关系考察发现，在 0.006 - 0.192mg/mL 的浓度范围内，葫芦巴碱浓度与峰面积呈现良好的线性关系，相关系数 R2>0.9999，适合定量分析。重复性和中间精密度实验中，日内 RSD 为 1.41%，日间 RSD 为 1.12%，均低于 2%，说明方法重复性和中间精密度良好。稳定性实验表明，在制备后 0 - 10h 内，RSD 为 0.83%，方法稳定性强。该方法的检测限（LOD）为 0.001mg/mL，定量限（LOQ）为 0.003mg/mL，灵敏度高，能满足痕量分析需求。加样回收率实验中，在 80%、100%、120% 三个浓度水平下，平均回收率分别为 97.83%、102.26%、98.16%，在 95% - 105% 的可接受范围内，证明方法准确性高。
研究结论表明，该方法系统适用性、稳定性、重复性和精密度都非常出色，能在标准实验室条件下快速实现葫芦巴碱的定性和定量分析。它填补了氨基亲水相互作用色谱（HILIC）柱用于葫芦巴碱分析的空白，为相关研究和实际应用提供了简单、快速、高效的分析手段。这一成果意义重大，不仅能为药物研发、质量控制和功能性食品开发提供可靠的技术支持，还为分析枸杞、咖啡等其他样品以及高极性亲水性物质开辟了新途径。不过，由于葫芦巴碱的高极性、亲水性以及与其他成分的相互作用，分析复杂样品时仍面临挑战。未来研究可进一步探索不同色谱条件和其他 HILIC 柱对葫芦巴碱分离的影响，推动相关领域的深入发展。
