单细胞多组学解析Graves眼病外周免疫动态图谱：CD8+效应T细胞驱动纤维化的新机制

中山眼科中心团队通过单细胞多组学（scRNA-seq/scATAC-seq/scTCR-seq/scBCR-seq）联合分析21例Graves眼病（GO）患者外周血，首次揭示CD8+效应T细胞（CD8 Te）通过克隆扩增、趋化迁移和表观遗传重编程促进眼眶纤维化的新机制，鉴定出SLC35G1/IDNK等疾病相关基因，为自身免疫性眼病诊疗提供新靶点。

　　

Graves眼病（GO）作为甲状腺功能亢进最常见的眼眶并发症，以眼睑退缩、眼球突出为特征，严重者可致不可逆视力丧失。尽管已知甲状腺刺激激素受体（TSHR）抗体是主要诱因，但为何仅部分Graves病患者发展为GO？传统糖皮质激素治疗为何疗效有限？这些问题的答案隐藏在免疫细胞的复杂调控网络中。既往研究多聚焦于CD4⁺T细胞，而对其他免疫亚群尤其是CD8⁺T细胞的致病机制知之甚少。中山眼科中心团队在《Communications Biology》发表的研究，通过单细胞多组学技术绘制了GO外周免疫全景图谱，揭开了CD8⁺效应T细胞（CD8 Te）驱动疾病进展的神秘面纱。

研究团队对21例GO患者和10例健康对照的外周血单个核细胞（PBMC）进行10X Genomics平台单细胞转录组（scRNA-seq）、染色质可及性（scATAC-seq）及免疫受体（scTCR/scBCR）测序，结合流式细胞术和免疫荧光验证，整合公共数据库的GWAS和eQTL数据，通过MAGMA和SMR分析挖掘疾病风险基因。

高分辨率免疫图谱解析发现，GO患者外周血CD8 Te细胞比例显著降低但克隆多样性增加，scTCR-seq显示GO特异性克隆扩增主要富集于该亚群。多组学整合分析揭示：CD8 Te细胞呈现独特的表观遗传特征，染色质开放区域富集FOS、NF-κB等促炎转录因子（TF）基序；通过轨迹分析发现，这些细胞在分化过程中IDNK表达逐渐降低，与GWAS鉴定的疾病风险变异位点rs75397435显著相关。更关键的是，免疫荧光证实CD8⁺GNLY⁺细胞在GO患者眼眶组织中异常浸润，CellChat分析显示其通过AREG-EGFR、TGFB1-TGFBR等通路激活成纤维细胞纤维化程序。

在B细胞方面，研究发现GO患者浆细胞（PB）比例下降但功能激活，scBCR-seq显示其呈现克隆性扩增，特别是NB3亚群高表达B细胞活化相关基因。NK细胞中CD160^high亚群通过AP-1和NF-κB通路增强炎症反应。单核细胞和树突状细胞虽数量无变化，但线粒体代谢通路显著激活。

研究最突破性的发现是通过SMR分析鉴定出SLC35G1（rs61865961）和IDNK（rs75397435）两个GO相关基因。实验验证显示，CD8 Te细胞中SLC35G1表达显著上调而IDNK下调，且男性患者变化更显著。这种表达模式与GD患者外周血一致，但在健康眼眶组织中恢复正常，提示CD8 Te细胞的迁移和局部激活是GO发生的关键环节。

该研究首次从多组学维度阐明GO外周免疫动态特征：CD8 Te细胞通过表观遗传重编程获得迁移和纤维化诱导能力，其克隆扩增和局部浸润构成"外周血-眼眶"的致病轴心。发现的SLC35G1/IDNK不仅可作为GD患者进展为GO的预测标志物，更为开发靶向CD8 Te细胞迁移或表观调控的新型疗法提供理论依据。研究建立的单细胞多组学整合分析方法，也为其他自身免疫疾病的机制研究提供了范式。