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Epstein - Barr 病毒（EBV）潜伏感染威胁人类健康，其复活与多种癌症相关。研究人员探究 TNF - α 对 EBV 复活的影响及机制。结果发现 TNF - α 通过 TNFR1 受体，影响 GPX4 蛋白及铁死亡通路抑制 EBV 复活，为治疗 EBV 相关疾病提供新思路。
在人类健康的 “战场” 上，Epstein - Barr 病毒（EBV）可谓是一个隐藏极深的 “危险分子”。EBV 是一种致癌的 γ - 疱疹病毒，全球超过 95% 的成年人都携带它，它通常潜伏在人体内，悄无声息地等待 “出击” 的时机。一旦人体免疫功能下降，或者受到药物、病原体等刺激，EBV 就会从潜伏状态苏醒，进入活跃的复制阶段。这可不是一件小事，它的复活与多种恶性肿瘤密切相关，像 Burkitt 淋巴瘤、鼻咽癌等，严重威胁着人们的生命健康。目前，如何有效抑制 EBV 复活成为了临床医学面临的一大挑战。
在这样的背景下，重庆医科大学附属第一医院等研究机构的研究人员挺身而出，开展了一项极具意义的研究。他们聚焦于肿瘤坏死因子 - α（TNF - α）对 EBV 复活的影响及其潜在机制。经过一系列深入研究，他们发现 TNF - α 能够显著抑制 EBV 复活，并且揭示了其背后的关键机制：TNF - α 主要通过作用于 TNFR1 受体，影响 GPX4 蛋白的表达，进而调节细胞的铁死亡（ferroptosis）状态，最终实现对 EBV 复活的抑制作用 。这一发现意义重大，为 EBV 相关疾病的早期治疗开辟了全新的视角，就像在黑暗中为医学研究人员点亮了一盏明灯。该研究成果发表在《Scientific Reports》上。
研究人员为开展这项研究，运用了多种关键技术方法。在细胞实验方面，培养了 Raji 和 LCL 这两种被 EBV 潜伏感染的细胞系。通过蛋白质免疫印迹（Western blot analysis）技术，检测相关蛋白的表达水平；利用 RNA 提取和定量聚合酶链反应（qPCR），分析特定基因的 mRNA 表达情况；借助 EBV DNA 提取和微滴数字 PCR 技术，测定病毒 DNA 的浓度。此外，还运用了免疫荧光测定（Immunofluorescence assay）、细胞凋亡检测（Apoptosis assay，如流式细胞术）、基因干扰（如使用小干扰 RNA 和慢病毒转染技术敲低特定基因）等技术手段。
下面来详细看看研究结果。
- TNF - α 通过作用于 TNFR1 受体抑制 EBV 复活：研究人员首先用 EBV 的阳性诱导剂 TPA 刺激处于 EBV 潜伏感染状态的 Raji 细胞，使其进入复活状态，此时 Zta 和 Rta 蛋白表达显著增加。接着用不同浓度的 TNF - α 处理复活的 Raji 细胞，发现 Zta 和 Rta 的表达水平随着 TNF - α 浓度的增加而降低，200ng/ml 的 TNF - α 抑制效果最佳。在 LCL 细胞中也得到了类似的结果。为了进一步验证，研究人员利用 TNFR1 小干扰 RNA 敲低 TNFR1 的表达，以及使用 TNFR1 抑制剂 R - 7050 处理细胞，结果发现 TNF - α 对 EBV 复活的抑制作用明显减弱。这一系列实验表明，TNF - α 通过 TNFR1 受体抑制 EBV 复活。
- TNF - α 通过影响 GPX4 蛋白表达抑制 EBV 复活：确认 TNF - α 能抑制 EBV 复活后，研究人员开始探索其潜在机制。通过流式细胞术检测发现，TNF - α 不会诱导 EBV 阳性的 Burkitt 淋巴瘤细胞发生凋亡。考虑到活性氧（ROS）与 EBV 复活密切相关，研究人员检测发现 TPA 会导致 ROS 显著增加，而 TNF - α 能显著逆转这一现象。进一步通过 TMT 蛋白质组学分析，发现 GPX4 蛋白是关键的差异蛋白。实验表明，TPA 会使 GPX4 和 SLC7A11 蛋白表达降低，而 TNF - α 能使它们的表达回升。敲低 GPX4 蛋白后，TNF - α 对 EBV 复活的抑制作用明显受损，这说明 TNF - α 通过影响 GPX4 蛋白表达来抑制 EBV 复活。
- TNF - α 通过影响 GPX4 依赖的铁死亡经典途径抑制 EBV 复活状态：研究发现 GPX4 在 TNF - α 抑制 EBV 复活的过程中起着关键作用，并且潜在的富集蛋白组学途径包括铁死亡。通过透射电子显微镜观察发现，TPA 会使线粒体形态发生改变，如线粒体膜密度增加、嵴不完整等，而 TNF - α 能部分逆转这些变化。敲低 GPX4 蛋白后，细胞内 ROS、丙二醛（MDA）水平增加，谷胱甘肽（GSH）与氧化型谷胱甘肽（GSSG）的比值降低，细胞内 Fe2 +水平和脂质过氧化物水平升高。这些结果表明，GPX4 表达降低会降低细胞对外部氧化刺激的耐受性，导致 EBV 复活，而 TNF - α 能通过影响铁死亡途径抑制 EBV 复活。
- 铁死亡激活剂（Erastin）和抑制剂（Fer - 1）对 EBV 复活的影响：研究人员用铁死亡抑制剂 Fer - 1 处理经 TPA 处理的 Raji 细胞，发现它能显著阻止线粒体的超微结构和形态改变，同时 Zta 和 Rta 蛋白表达降低。用铁死亡激活剂 Erastin 处理细胞后，线粒体嵴减少或消失，外膜破裂，Zta 和 Rta 蛋白以及 EBV 复活相关基因 BZLF1 和 BRLF1 的表达水平均增加 。这表明铁死亡的加剧会导致 EBV 复活，抑制铁死亡则能在一定程度上抑制 EBV 复活。
综合上述研究结果，研究人员得出结论：TNF - α 通过作用于 TNFR1 受体，影响 GPX4 蛋白表达，进而调节细胞的铁死亡状态，最终抑制 EBV 复活。这一研究成果为理解 EBV 复活的机制提供了新的视角，也为 EBV 相关疾病的治疗提供了潜在的新靶点和新思路。然而，目前铁死亡研究领域仍存在一些未解决的问题，如缺乏检测铁死亡的金标准，铁死亡与其他类型细胞死亡之间的相互作用和转化尚不明确等。未来还需要进一步的研究来深入探索这些问题，验证 TNF - α 以及铁死亡抑制剂和激活剂在 EBV 相关疾病治疗中的潜力，为攻克 EBV 相关疾病带来更多希望。
