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这篇研究开发了一种从外周血出发，引发并扩增针对 KRAS 新抗原（mKRAS）的 T 细胞应答的方法。该方法能产生具有良好特性的 T 细胞和 T 细胞受体（TCR），有望用于 KRAS 靶向细胞治疗或 TCR 发现，为癌症免疫治疗提供新方向。
研究背景
约四分之一的人类癌症存在 Kirsten 大鼠肉瘤（KRAS）基因改变，常见于热点密码子 12。在胰腺癌、结直肠癌和非小细胞肺癌中，KRAS 突变比例较高。KRAS 突变是驱动突变，可激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路，促进肿瘤发生，是极具吸引力的治疗靶点。虽然针对 KRAS 突变的小分子药物取得进展，但多数情况下会出现快速耐药。
基于部分人类白细胞抗原 I 类（HLA-I）等位基因能呈递 KRAS 突变肽（KRAS 新抗原，mKRAS），使 CD8+ T 细胞识别并杀伤 mKRAS+肿瘤细胞的原理，疫苗和过继性 T 细胞疗法（ACT）等免疫治疗方法得以发展。然而，KRAS 新抗原天然免疫原性较低，患者体内自发的 CD8+ T 细胞应答较少，且获取足够肿瘤材料用于肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）制造并不容易。因此，研究旨在开发一种从外周血生成针对 mKRAS 的 T 细胞应答的免疫治疗方法，用于个性化治疗或 TCR 发现。
研究方法
研究基于之前的 NEO - STIM 基础方案进行优化，开发出从外周血生成针对 KRAS 新抗原的 T 细胞应答的流程。该流程包括初始刺激（STIM1）、富集和扩增三个阶段。在 STIM1 阶段，对细胞培养条件、刺激剂添加和接种密度等参数进行优化；富集阶段通过检测激活标记物，利用 4 - 1BB 或 CD69 对特异性 T 细胞进行富集；扩增阶段优化培养条件和刺激剂，以提高细胞数量和特异性细胞比例。
研究结果
- 抗原特异性 T 细胞的富集：研究评估了多种激活标记物，发现 4 - 1BB 和 CD69 在抗原特异性 CD8+ T 细胞上表达上调明显，可用于高效富集。同时，该方法对 CD4+ T 细胞也有富集作用，基于 4 - 1BB 的富集方法因有大规模良好生产规范（GMP）试剂而被采用。大规模富集实验显示，该方法能使抗原特异性 CD8+ T 细胞频率显著提高，且最终细胞产物具有肽特异性和抗原特异性细胞毒性。
- 优化流程提高细胞产量和特异性：通过优化 STIM1 和扩增阶段的条件，如在 STIM1 阶段调整接种密度、添加白细胞介素 2（IL - 2），在扩增阶段添加 CD3/CD28 激动剂和进行全培养基填充，显著提高了总细胞数量和抗原特异性细胞频率。优化后的方案使 mKRAS 特异性 CD8+ T 细胞数量大幅增加，多数实验达到目标数量。
- 不同 KRAS 新抗原的免疫原性差异：研究对 20 名健康供体进行测试，发现针对不同 KRAS 新抗原的 T 细胞应答存在差异。总体上，G12V 新抗原的免疫原性高于 G12D 新抗原，且不同突变 / HLA - I 组合的免疫原性也不同。例如，G12V 在某些 HLA - I 等位基因上的免疫原性较高，而 G12D 在 A?03:01 上的应答较低。
- T 细胞产品的抗肿瘤效果：优化流程产生的 mKRAS 特异性 T 细胞产品在体外和体内实验中均显示出一定的抗肿瘤效果。体外实验中，T 细胞产品能杀伤表达相应抗原的肿瘤细胞并诱导干扰素 γ（IFNγ）分泌；体内实验中，可显著减缓肿瘤生长，但与工程化 TCR - T 相比，其在体内的持久性和扩增能力较弱。
- TCR 发现：从健康供体中筛选和测序 mKRAS 特异性 CD8+ T 细胞的 TCR，发现部分 TCR 的功能亲和力与临床有效基准 TCR 相当，且对天然表达 mKRAS 的肿瘤细胞具有特异性杀伤作用。这表明该流程可用于发现具有临床评估潜力的 TCR。
研究讨论
研究成功开发出从外周血生成针对 KRAS 新抗原的 T 细胞应答的流程，可用于 ACT 治疗或 TCR 发现。该流程对 KRAS G12D 和 G12V 突变具有较好效果，且可扩展到其他 KRAS 新抗原、HLA - I 等位基因、肿瘤相关抗原或个性化新抗原。然而，不同 KRAS 新抗原的免疫原性存在差异，G12V 新抗原通常更具免疫原性。为提高治疗效果，可通过基因工程增强 T 细胞产品的持久性和体内扩增能力，进一步评估选择标记物，筛选更强的 TCR。
研究局限性
研究存在一定局限性。KRAS 新抗原免疫原性的观察因实验方案和供体不同，需用患者白细胞单采样本进一步验证。此外，对 CD4+ T 细胞应答的详细评估不足，且用于评估 TCR 的靶细胞系多为工程化细胞系，用非工程化细胞系评估将更具说服力。
研究展望
本研究为靶向 KRAS 新抗原的免疫治疗提供了重要基础。未来可进一步优化治疗方案，结合现有治疗方法，有望克服当前 KRAS 靶向治疗的局限性，为更多癌症患者带来希望。同时，对 T 细胞产品和 TCR 的深入研究，将推动癌症免疫治疗领域的发展。
