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为解决非小细胞肺癌（NSCLC）治疗难题，研究人员开展了关于 Polyphyllin I（PPI）抗肿瘤特性的研究。结果发现 PPI 可诱导 NSCLC 细胞铁死亡并抑制其增殖，还能增强抗肿瘤免疫。该研究为肺癌治疗提供了新方向。
肺癌，如今已成为全球癌症相关死亡的首要原因，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占比高达 80 - 85%。多数患者确诊时已处于晚期，现有手术、化疗、放疗等治疗手段，效果却不尽人意，患者五年生存率较低。传统中药在肿瘤治疗方面展现出独特优势，Polyphyllin I（PPI）作为从中药重楼中提取的活性成分，已被证实对多种癌症具有抗肿瘤活性。在此背景下，为探寻更有效的 NSCLC 治疗策略，广东省中医院等机构的研究人员开展了 PPI 在 NSCLC 治疗中的相关研究，该研究成果发表于《Biomedicine》 。
研究人员主要运用了细胞实验技术、分子生物学技术、动物模型构建技术和免疫检测技术。在细胞实验技术方面，采用 CCK - 8 法、EdU 法和集落形成实验检测细胞增殖；运用流式细胞术检测细胞内脂质过氧化物和 Fe2 +浓度。分子生物学技术上，通过蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测相关蛋白表达水平，利用分子对接探究 PPI 与 EZH2 的结合情况。动物模型构建技术上，构建 NSCLC 荷瘤小鼠模型观察 PPI 体内抗肿瘤效果。免疫检测技术方面，运用免疫荧光检测肿瘤组织中 CD8+T 细胞浸润情况 。
研究结果
- PPI 抑制 NSCLC 细胞体外生长：显微镜观察发现，PPI 处理后的细胞数量减少且形态收缩。CCK - 8 实验表明，PPI 以剂量和时间依赖的方式抑制 A549 和 PC9 细胞活力。集落形成实验和 EdU 实验进一步证实，PPI 显著抑制 NSCLC 细胞的生长和增殖。
- PPI 诱导 NSCLC 细胞铁死亡
- PPI 诱导铁死亡的证据：PPI 与铁死亡抑制剂 Liproxstatin - 1 联合处理细胞后，细胞活性增加，说明 PPI 可能诱导 NSCLC 细胞发生铁死亡。此外，PPI 处理后，细胞内脂质过氧化物水平升高，氧化型谷胱甘肽（GSH）与总谷胱甘肽以及 GSH / 氧化型谷胱甘肽（GSSG）比值显著下调，Fe2 +浓度增加，铁死亡相关蛋白 NCOA4 和 Ferritin 也发生显著变化。
- PPI 通过铁自噬诱导铁死亡：PPI 处理使 A549 和 PC9 细胞中 NCOA4 蛋白水平上调，Ferritin 蛋白水平下调，推测其可能通过诱导铁自噬引发铁死亡。实验发现，自噬抑制剂氯喹可显著挽救 PPI 导致的细胞活性下降，还能逆转 PPI 处理引起的细胞内脂质过氧化物上调、Ferritin 重链 FTH1 下调和 NCOA4 蛋白上调。
- EZH2 在 PPI 诱导铁死亡中的作用：EZH2 是调控肿瘤发生发展的重要上游蛋白，与铁死亡相关。研究显示，PPI 下调 NSCLC 细胞中 EZH2 的蛋白和 mRNA 水平。分子对接证实 PPI 与 EZH2 存在直接结合作用。过表达 EZH2 可逆转 PPI 对 NSCLC 细胞的抑制作用，以及 PPI 诱导的脂质过氧化、Fe2 +水平升高和铁死亡相关蛋白的变化 。
- PPI 抑制体内 NSCLC 并促进抗肿瘤免疫：构建小鼠肺癌模型发现，PPI 处理组（高剂量和低剂量）肿瘤生长显著受抑制。PPI 处理后，小鼠肿瘤组织中 NCOA4 蛋白水平升高，Ferritin 蛋白水平降低，表明发生了铁自噬。PPI 处理 A549 细胞后，上清液中 HMGB - 1 水平升高，且该变化可被铁死亡抑制剂逆转，说明 PPI 诱导 NSCLC 细胞铁死亡并释放 HMGB - 1。此外，PPI 处理的小鼠血液中 CD8+T 细胞增加，肿瘤组织中 CD8+T 细胞浸润显著增多 。
研究结论与讨论
研究表明，PPI 显著抑制 NSCLC 细胞增殖并诱导其发生铁死亡。具体而言，PPI 可能通过增强 NCOA4 介导的 Ferritin 自噬降解诱导铁死亡，而 EZH2 下调在这一过程中起关键作用。同时，PPI 可增强体内抗肿瘤免疫，促进 CD8+T 细胞浸润到肿瘤组织。这一研究揭示了 PPI 在 NSCLC 治疗中的重要作用，为 NSCLC 的治疗提供了新的潜在药物和作用机制，有望为临床治疗带来新的突破。然而，EZH2 影响 PPI 疗效的具体机制仍有待进一步研究明确，这也为后续研究指明了方向 。
