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原发性卵巢功能不全（POI）影响 1 - 3% 的 40 岁以下女性，现有治疗手段存在局限。研究人员开展基于超临界二氧化碳（scCO2）构建人脱细胞卵巢支架的研究，得出 1% SDS 预处理联合 scCO2的优化方案，为卵巢组织工程应用提供新途径。
在当今社会，女性的寿命普遍延长，然而，这也带来了新的健康挑战。许多女性在绝经后的漫长岁月里，饱受雌激素减少带来的各种困扰，像潮热、失眠、不孕不育、骨质疏松以及心血管疾病等问题接踵而至。对于那些患有原发性卵巢功能不全（POI）的女性来说，情况更为糟糕，她们在 40 岁之前就提前进入了更年期，承受着比同龄人更多的痛苦。
目前，针对 POI 和提前绝经的治疗手段虽然不少，比如激素替代疗法（HRT）、卵巢组织冷冻保存、体外激活（IVA）以及干细胞疗法等，但这些方法都存在明显的缺陷。HRT 长期使用会增加患癌和心血管疾病的风险，让很多女性望而却步；IVA 和冷冻保存技术虽然旨在刺激休眠的原始卵泡以促进自然受孕，但卵泡耗竭和卵子质量的问题始终让人担忧。在这样的困境下，构建生物工程卵巢成为了科研人员们努力探索的新方向。
来自伊朗设拉子医科大学（Shiraz University of Medical Sciences）等机构的研究人员勇挑重担，开展了一项极具意义的研究。他们致力于开发一种基于超临界二氧化碳（scCO2）的优化方案，构建人脱细胞卵巢支架。研究成果意义重大，为卵巢组织工程的发展开辟了新的道路，相关论文发表在《BioMedical Engineering OnLine》杂志上。
研究人员在这项研究中运用了多种关键技术方法。首先，他们精心收集了来自 transgender 志愿者和子宫内膜异位症患者的健康人卵巢组织作为样本。接着，通过 DNA 定量技术，精确测定组织中的 DNA 含量，以此来评估细胞的去除情况；利用组织学染色，如苏木精 - 伊红（H&E）染色、Masson 三色染色等，清晰观察细胞外基质（ECM）的结构和成分；借助扫描电子显微镜（SEM），直观地查看细胞的去除效果以及三维结构的保存状况；还通过 MTT 试验，严谨地评估支架的细胞相容性。
下面我们详细看看研究结果：
- 脱细胞过程评估：实验分为两个阶段。在第一阶段，研究人员在 40°C 和 1.5 小时的条件下，分别使用 200 bar 和 300 bar 的 scCO2处理样本。结果显示，虽然样本的 DNA 含量显著降低，但并未达到既定的脱细胞标准。到了第二阶段，研究人员做出了两项改进。一组添加 70% 乙醇作为共溶剂，另一组则用 1% 十二烷基硫酸钠（SDS）进行预处理。最终发现，1% SDS 预处理 4 小时，再结合 200 bar、40°C、1.5 小时的 scCO2处理，能够使卵巢组织的 DNA 含量大幅降低至 30.33 ng/mg 干重，成功满足脱细胞标准。
- ECM 保存的表征：
- 组织学染色结果：H&E 染色清晰地显示，经过 1% SDS 预处理结合 scCO2处理后，组织切片中几乎没有核酸物质，组织架构完整保留。Gomori 醛品红染色表明，弹性纤维在脱细胞组织中依然存在，且分布和结构与天然组织相似。Masson 三色染色发现，胶原蛋白在脱细胞组织中大量存在，其分布和结构完整性与天然组织相当。Periodic acid - Schiff（PAS）染色和阿尔辛蓝染色则显示，碳水化合物和糖胺聚糖（GAGs）在脱细胞组织中也得到了较好的保留。
- GAGs 定量结果：对 GAGs 含量进行量化分析后发现，虽然脱细胞组织中的 GAGs 含量相较于天然组织有所下降，但仍成功保留了超过 70%。
- SEM 评估结果：SEM 观察结果表明，脱细胞后的卵巢支架不仅有效去除了细胞，还完好地保留了微结构的完整性，卵巢表面上皮、纤维网络以及血管等结构都清晰可见。
- 细胞毒性测定：MTT 试验的结果令人欣喜，接种在脱细胞支架上的人脐带间充质干细胞（HWJMSCs）在整个培养期都保持着活力，并且随着培养时间的增加，细胞的代谢活性显著提高，增殖情况良好。
在研究结论和讨论部分，研究人员提出的 1% SDS 预处理联合 scCO2的优化方案，成功解决了传统脱细胞方法存在的诸多问题，比如处理时间长、残留化学物质可能产生毒性等。该方案在有效去除细胞的同时，最大程度地保留了 ECM 的结构和功能，为细胞的黏附、迁移和增殖提供了理想的环境。不过，研究人员也指出，虽然取得了重要进展，但仍需进一步开展全面的安全性评估，包括免疫原性评估和体内研究，同时进行定量拉伸强度测试，以更全面地评估基于 scCO2的卵巢脱细胞支架在生理条件下的生物力学完整性。
总的来说，这项研究成果为卵巢组织工程领域注入了新的活力，为未来治疗 POI 和其他卵巢相关疾病带来了新的希望和方向。它为构建更加接近天然卵巢功能的生物工程卵巢奠定了坚实的基础，有望在未来改善众多女性的健康状况，让那些深受卵巢疾病困扰的女性看到了新的曙光。
