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柴胡(Bupleurum chinense DC.)是重要药用植物,其种内变异研究不足影响开发利用。研究人员分析其形态、遗传和化学表型,发现显著种内变异,确定 3 个分支且安徽种质资源优。为合理利用柴胡资源提供依据。
在传统医学的大舞台上,柴胡(
Bupleurum chinense DC.)可是一位 “明星” 药材。它的干燥根,也就是人们熟知的柴胡(Radix Bupleuri),有着调节肝功能、促进气血运行、缓解疼痛等诸多功效,在中医药典中占据着重要地位,还被广泛应用于逍遥丸、小柴胡颗粒等众多中成药里。随着对柴胡需求的不断增长,2022 年其需求量已超 9000 吨。
然而,这位 “明星” 却有着许多不为人知的秘密。柴胡在分类学上较为复杂,种内变异情况一直模糊不清。以往的研究由于样本量小、地理分布范围窄,难以清晰地呈现其全貌。而且,基于 DNA 条形码的遗传信息也十分有限,这就像在黑暗中摸索,很难准确把握柴胡的种内谱系划分和系统发育关系。这种不明确的状况严重阻碍了柴胡的优化开发、合理利用以及临床应用的安全性和有效性。于是,为了揭开柴胡的神秘面纱,南方医科大学的研究人员踏上了探索之旅,他们的研究成果发表在了《BMC Plant Biology》上。
研究人员开展了一项多方位的研究。首先是样本采集,他们从中国 9 个省(市)的 31 个自然种群收集了野生柴胡标本,这些样本涵盖了柴胡在中国的核心分布区域,为研究提供了丰富的素材。
在研究方法上,主要运用了以下关键技术:一是对 168 份标本的 21 个形态学性状进行量化分析,包括植株高度、根长、叶形等,通过标准化处理和主成分分析(PCA)等方法,来探究形态学变异;二是提取标本的总基因组 DNA,进行高通量测序,对质体基因组进行从头组装和注释,分析质体基因组的变异和遗传多样性;三是基于系统发育树分析,选取代表性样本,利用高效液相色谱(HPLC)技术测定柴胡皂苷 a(SSa)、柴胡皂苷 c(SSc)和柴胡皂苷 d(SSd)的含量。
研究结果如下:
- 种内形态变异:测量的 25 个形态学性状差异明显,主成分分析筛选出 6 个主成分,解释了 74.0% 的总变异。聚类分析将标本分为两个形态类群,地理分布呈现明显差异,2 类群主要来自中国西部,1 类群来自中部和东部,过渡区域种群混合。
- 柴胡质体基因组结构:柴胡完整质体基因组大小变化有限,为 154,789 - 155,963 bp,呈保守的四分体结构。编码 133 - 134 个功能基因,部分基因存在内含子、假基因化现象。
- 质体基因组变异与遗传多样性:分析发现 2,343 个可变位点,确定了 9 个高变基因区域和 10 个高变间隔区。40 个质体基因组有 34 种单倍型,不同地区单倍型和核苷酸多样性有差异。
- 系统发育关系与种群结构:最大似然(ML)系统发育分析确定了 3 个分支,种群结构分析也支持这一结果。不同分支间遗传分化明显,基因流有限,地理隔离是种群分化的重要因素。
- 植物化学变异分析:建立的分析方法可靠,10 个柴胡种群的柴胡皂苷含量有显著地理差异,所有样本都符合药典标准,安徽样本总皂苷含量较高,但皂苷含量与遗传分化无显著相关性。
在研究结论和讨论部分,研究人员发现柴胡存在显著的种内变异。形态学上,东西部存在差异,为种质分类和野外鉴定提供了参考;质体基因组分析筛选出了潜在的分类和鉴定标记;遗传分化方面,确定了 3 个遗传分支,地理隔离影响种群分化,且遗传与柴胡皂苷含量无显著关联,说明环境因素对皂苷含量影响更大。同时,研究也指出形态学和遗传学分析存在不一致的地方,未来需要结合核基因研究进一步深入探究。
这项研究意义重大,它全面揭示了柴胡的种内变异情况,让人们对柴胡有了更深入的认识。确定了遗传多样性高且柴胡皂苷含量高的安徽种质资源,为柴胡资源的合理利用提供了科学依据,有助于保障其临床应用的有效性和安全性,推动柴胡在医药领域的进一步开发和利用。