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三阴性乳腺癌（TNBC）转移难治，现有疗法疗效有限。研究人员开展溶瘤病毒 VSVd51 介导 miR-199a-5p 治疗 TNBC 的研究。结果显示，该疗法在不同细胞系和小鼠模型中效果各异，未显著提升疗效。这为 TNBC 治疗研究提供了方向。
三阴性乳腺癌（TNBC）一直是癌症治疗领域的难题。它具有极强的转移性，与其他乳腺癌亚型相比，TNBC 患者更容易出现肿瘤转移，一旦发生转移，患者的长期生存率就会大幅下降。目前，虽然免疫检查点抑制剂（ICI）等疗法为 TNBC 的治疗带来了新希望，但像派姆单抗（pembrolizumab）这样的药物，疗效依然不尽人意 ，这让科研人员迫切地想要寻找更有效的治疗方法。
在这样的背景下，来自加拿大 Université de Sherbrooke 等机构的研究人员，开展了一项极具创新性的研究。他们试图将溶瘤病毒疗法与 RNA 干扰技术相结合，通过改造水泡性口炎病毒（VSVd51），让其表达与 TNBC 治疗相关的微小 RNA（miRNA）——miR-199a-5p，以此来抑制癌细胞的迁移、侵袭和免疫抑制相关基因的表达，达到更好的治疗效果。该研究成果发表在《Scientific Reports》上。
研究人员在这项研究中运用了多种关键技术方法。细胞实验方面，他们培养了 4T1 和 MDA-MB-231 细胞系，前者是转移性小鼠 TNBC 细胞系，后者是人类基底样 TNBC 细胞系。通过细胞活力检测、qPCR 和蛋白质免疫印迹（Western blot）等技术，分别测定细胞活力、基因和蛋白表达水平。动物实验上，构建了 BALB/c-4T1 小鼠原位模型和 MDA-MB-231 裸鼠异种移植模型，来观察病毒疗法在体内的治疗效果，同时运用统计分析方法对实验数据进行处理。
下面来看看具体的研究结果：
- VSVd51 在 TNBC 细胞系中过表达 miR-199：研究人员构建了两种表达不同成熟阶段 miR-199 的 VSVd51 变体，即 VSVd51-pri-miR-199 和 VSVd51-pre-miR-199。经过细胞活力检测和 miR-199 表达定量分析发现，这两种病毒构建体在小鼠 4T1 和人类 MDA-MB-231 TNBC 细胞系中都具有细胞毒性，且都能诱导 miR-199 过表达，其中 VSVd51-pre-miR-199 感染后 miR-199 的过表达水平有升高趋势，但差异不显著。
- VSVd51-miR-199 对 4T1 细胞系 EMT 相关基因表达无抑制作用：在体外实验中，研究人员对 4T1 细胞系中 miR-199 预测的靶基因进行 qPCR 检测，包括 Hspa5、Map3k11、Hif1a、Ets1 等，同时检测了重要的 EMT 转录因子 Snai1 和 Twist1 的表达，以及上皮和间质状态的标志物 E-cadherin（Cdh1）和 Vimentin（Vim）的表达。结果显示，VSVd51-pri-miR-199 和 VSVd51-pre-miR-199 都不能有效抑制这些 EMT 相关基因的表达。
- VSVd51-miR-199 在 BALB/c-4T1 小鼠模型中无显著疗效：在 BALB/c-4T1 小鼠模型中进行体内实验，给小鼠原位植入 4T1 细胞，待肿瘤生长到一定体积后，分别用 VSVd51-shNTC（阴性对照）和 VSVd51-miR-199 进行瘤内注射治疗。结果发现，两组小鼠的肿瘤生长情况和生存曲线相似，虽然在第 19 天，VSVd51-miR-199 治疗组的肿瘤体积略低于对照组，但差异无统计学意义。此外，在新辅助治疗实验中，联合原发性肿瘤切除，VSVd51-miR-199 也未能提高小鼠的生存率。
- VSVd51-miR-199 对 MDA-MB-231 细胞系 ZEB1 表达的影响：在人类 MDA-MB-231 TNBC 细胞系中，研究人员发现，VSVd51-miR-199 感染后，ZEB1、GRP78 和 MLK3 的蛋白质表达未受抑制，但 ZEB1 的 mRNA 相对表达量显著下降。这表明 ZEB1 在该细胞系中受到 VSVd51-miR-199 的差异性调控。
- VSVd51-miR-199 在 MDA-MB-231 异种移植小鼠模型中无显著抑瘤作用：将 MDA-MB-231 细胞植入免疫缺陷的裸鼠体内，分别用 PBS、VSVd51-shNTC 和 VSVd51-pre-miR-199 进行治疗。结果显示，虽然 OV 治疗组的小鼠肿瘤生长有所减缓，但 VSVd51-pre-miR-199 组与 VSVd51-shNTC 组的平均肿瘤生长情况没有差异，说明 VSVd51-miR-199 在该模型中对肿瘤体积的减小没有显著作用。
综合研究结果和讨论部分来看，这项研究意义重大。虽然研究发现添加 miR-199 并没有比单独使用 VSVd51 介导的溶瘤作用更有效地提高治疗效果，但也观察到了一些潜在的现象，比如在 BALB/c-4T1 模型中第 19 天肿瘤体积的变化趋势，这提示 miR-199 可能存在一定的生物学活性，只是还需要更深入的研究和更有效的靶点结合才能发挥治疗作用。研究还指出了现有研究的局限性，比如人类和小鼠 miR-199 靶点不完全重叠、miRNA 生物发生与病毒复制的亚细胞区室化问题等。这为后续研究提供了明确的方向，未来可以进一步探索更适合与 VSVd51 或其他溶瘤病毒载体结合的 miRNA，优化载体设计，同时拓展细胞系和动物模型的种类，深入研究 miRNA 与肿瘤微环境、病毒之间的相互作用，为 TNBC 的治疗开辟新的道路。
