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为探究不同酸性环境对绿豆球蛋白(MBG)结构转变和纤维化的影响,研究人员用 HCl 和 3 种有机酸处理 MBG,结合多种技术及分子动力学(MD)模拟研究。结果显示,HCl 显著促进 MBG 纤维化和功能提升,有机酸则促进快速凝胶化。该研究为 MBG 应用提供理论依据。
在食品和生物材料领域,淀粉样纤维凭借其独特的理化性质,如高度有序的结构、出色的刚性和高长径比,展现出巨大的应用潜力,尤其是在乳化和凝胶化方面。通常,蛋白质淀粉样纤维在酸性条件(pH 2 - 3)和高温(80 - 95°C)下形成,在此过程中,蛋白质会发生水解并重新组装成富含 β - 交叉结构的纳米纤维。然而,传统用于维持酸性环境促进纤维化的盐酸(HCl)在食品加工中存在隐患。长时间加热时,商业蛋白质源中的残留脂质会与 HCl 反应,生成诸如氯丙醇及其衍生物等有害化合物。因此,寻找安全无毒的 HCl 替代品迫在眉睫。
与此同时,食品衍生酸在食品加工中扮演着重要角色,除了作为风味增强剂和 pH 调节剂,像柠檬酸(CA)、苹果酸(MA)等有机酸还能诱导蛋白质交联,改善其功能特性。但目前,乳酸(LA)、MA 和 CA 等食品衍生酸对淀粉样纤维结构和功能的影响尚不明确,针对植物蛋白纤维化行为的系统研究也较为匮乏。绿豆球蛋白(MBG)作为绿豆中的主要储存蛋白,占总蛋白含量的 80%,因其良好的溶解性、乳化性和凝胶性在食品工业中广泛应用,且在酸性条件下可形成淀粉样纤维(MBGF),具备优良的功能特性。不过,关于 MBG 在不同酸性环境中的聚集行为和纤维化机制的研究依旧有限。
为了解决上述问题,来自未知研究机构的研究人员开展了一项系统性研究。该研究整合光谱技术、可视化成像和分子动力学(MD)模拟等方法,深入探究不同酸性环境对 MBG 结构转变和纤维化的影响。相关研究成果发表在《Food Bioscience》上。
在研究方法上,研究人员主要运用了以下几种关键技术:首先是 ThT 荧光光谱技术,利用 ThT 能特异性结合淀粉样纤维 β - 交叉结构的特性,检测 MBGF 的形成情况;傅里叶变换红外光谱(FT - IR)用于分析蛋白质结构的变化;透射电子显微镜(TEM)直观观察纤维的形态;通过流变学分析研究样品的流变特性;此外,还借助 MD 模拟从分子层面探究不同酸对 MBG 展开和动态结构变化的影响 。
ThT 荧光光谱分析
通过 ThT 荧光光谱研究不同酸性环境对 MBGF ThT 荧光强度的影响。蛋白质淀粉样纤维的生长曲线一般呈 “S” 形,包含延迟期、生长期和成熟期。研究发现,在加热初始的 0 - 4 小时,荧光强度稳步变化。其中,由 HCl 诱导形成的绿豆蛋白淀粉样纤维(MBGF)的 ThT 荧光强度最强,比有机酸(LA、MA 和 CA)诱导的高 6 倍,这表明 HCl 环境下 MBG 的纤维化能力最强。
结构形态观察
利用透射电子显微镜(TEM)观察发现,HCl - MBGF 形成了紧密且均匀的纤维,直径约为 5nm;而有机酸诱导的 MBGF 则形成了相互缠绕的纤维,并伴有凝胶状网络结构,直径约为 20nm 。这直观地展示出不同酸性环境对 MBGF 结构形态的显著影响。
功能特性分析
功能分析进一步表明,HCl - MBGF 具有最高的乳化活性指数(EAI),达到 17.25 ± 0.13 m2/g,相较于 MBG(4.79 ± 0.23 m2/g)提升了约 260%,同时其流变学性能也得到增强。相反,由有机酸形成的 MBGF 虽然纤维化能力较弱,但却促进了快速凝胶化过程。
分子动力学模拟
MD 模拟结果显示,HCl 能够破坏蛋白质的二级结构,促使 β - 折叠结构的形成,而 β - 折叠结构对于纤维化至关重要。相比之下,有机酸(尤其是 MA)更有利于蛋白质的展开,增加了蛋白质的柔性。
综合上述研究结果,该研究全面地考察了不同酸性环境对 MBG 结构转变和纤维化的影响。研究结论强调了酸的类型在决定 MBGF 的形成、稳定性和功能特性方面起着关键作用。HCl 提供的酸性环境显著增强了淀粉样纤维化,虽然有机酸也能促使蛋白质淀粉样纤维的形成,但效果与 HCl 有所不同。这一研究成果为 MBG 淀粉样纤维的制备提供了理论依据,有助于拓宽其在食品工业中的潜在应用,比如在食品乳化、凝胶制作等工艺中,可根据实际需求选择合适的酸化剂来调控 MBG 的性质,从而优化食品的品质和性能。同时,也为后续深入研究植物蛋白在不同环境下的纤维化机制奠定了基础,推动食品科学领域在蛋白质应用方面的进一步发展。