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胰腺癌免疫治疗面临间皮素（MSLN）表达异质性及免疫抑制性肿瘤微环境（TME）等挑战。本研究构建表达 MSLN 的溶瘤单纯疱疹病毒（HSV-MSLN），联合 MSLN-CAR T 细胞治疗小鼠模型，发现其可提升抗原密度、重塑 TME，显著增强抗肿瘤效应，为实体瘤免疫治疗提供新策略。
胰腺癌因其恶性程度高、预后差，被称为 “癌中之王”。目前，免疫治疗在胰腺癌中的效果有限，CAR-T 细胞治疗虽以间皮素（MSLN）为靶点展现潜力，但面临两大难题：一是肿瘤细胞表面 MSLN 表达异质性高，易随时间下调或脱落；二是胰腺癌特有的免疫抑制性肿瘤微环境（TME），充斥着调节性 T 细胞（Tregs）等抑制性免疫细胞，阻碍 CAR-T 细胞的浸润与活化。因此，如何提升 MSLN 抗原密度并重塑 TME，成为突破 CAR-T 细胞治疗胰腺癌瓶颈的关键。
日本名古屋大学的研究人员开展了一项创新研究，他们设计了一种表达人源 MSLN 的溶瘤单纯疱疹病毒（HSV-MSLN），并将其与 MSLN-CAR T 细胞联合应用于小鼠胰腺导管腺癌（PDAC）模型。研究发现，这种联合疗法能显著抑制肿瘤生长、延长小鼠生存期，为胰腺癌免疫治疗提供了新的思路。该研究成果发表在《Cancer Immunology, Immunotherapy》。
研究主要采用了以下关键技术方法：
- 病毒构建与细胞模型：利用临床 HSV1 毒株，通过基因编辑删除 γ34.5 神经毒力基因，插入 CMV 启动子驱动的人 MSLN 基因，构建 HSV-MSLN；建立表达 MSLN 的 Pan02 和 KPC 小鼠胰腺癌细胞系。
- CAR-T 细胞制备：从 C57BL/6 小鼠脾脏分离 T 细胞，通过逆转录病毒转导表达含 MSLN 靶向单链抗体（scFv）、CD28 和 CD3ζ 信号域的第二代 CAR，制备 MSLN-CAR T 细胞。
- 体内外功能验证：通过流式细胞术检测 MSLN 表达、T 细胞活化标志物及免疫细胞浸润；利用 MTT 法、病毒复制 assay 评估细胞毒性与病毒复制能力；在小鼠皮下肿瘤模型中进行治疗实验，监测肿瘤生长与生存情况。
研究结果
1. HSV-MSLN 体外有效递送 MSLN 并激活 CAR-T 细胞
HSV-MSLN 感染 Pan02 和 KPC 细胞后，MSLN 表达呈 MOI 依赖性升高，最高可达 80% 细胞阳性。感染后的肿瘤细胞与 MSLN-CAR T 细胞共培养，可显著诱导 CAR-T 细胞分泌 IFN-γ，表达 CD69、CD25 等活化标志物，并高效杀伤靶细胞。此外，HSV-MSLN 感染肿瘤细胞释放的因子可促进骨髓来源树突状细胞（BMDCs）成熟，上调 CD86、CD40 和 MHCII 表达。
2. HSV-MSLN 体内重塑 TME 并增强抗肿瘤免疫
在小鼠 PDAC 模型中，HSV-MSLN 瘤内注射可安全抑制肿瘤生长，增加肿瘤浸润 CD8+T 细胞、自然杀伤（NK）细胞和常规树突状细胞（cDC1，CD103+CD11c+），减少 Tregs 数量。肿瘤引流淋巴结（TDLNs）中，CD8+T 细胞活化标志物 CD44、CD69 表达升高，显示 naive T 细胞向效应细胞的转化。
3. 联合疗法协同增强抗肿瘤效应
HSV-MSLN 与 MSLN-CAR T 细胞联合治疗组的肿瘤抑制效果显著优于单药治疗，Pan02 和 KPC 模型中分别实现肿瘤生长延缓和生存期延长，部分小鼠出现完全缓解（CR）。机制上，联合疗法促进 CAR-T 细胞在肿瘤内的增殖与活化（Ki67+CD69+），减少 PD-1+TIM-3+耗竭性 CD8+T 细胞，并增加迁移性树突状细胞（XCR1+CD103+DCs）在肿瘤及 TDLNs 中的浸润，同时诱导中央记忆（TCM）和效应记忆（TEM）CD8+T 细胞扩增，形成持久免疫应答。
研究结论与意义
本研究首次证实，溶瘤病毒 HSV-MSLN 通过双重机制提升 CAR-T 细胞治疗胰腺癌的效果：一方面，病毒感染肿瘤细胞后强制表达 MSLN，解决抗原异质性问题，确保 CAR-T 细胞有效识别；另一方面，病毒通过溶瘤作用释放免疫原性物质，招募并激活 CD8+T 细胞、树突状细胞，减少抑制性免疫细胞，将 “冷肿瘤” 转化为 “热肿瘤”。联合疗法进一步通过 CAR-T 细胞与病毒的协同作用，增强效应 T 细胞功能并诱导记忆性免疫，为胰腺癌等实体瘤的免疫治疗提供了 “病毒重编程 TME+CAR-T 细胞精准杀伤” 的联合策略。未来可探索 HSV-MSLN 与其他免疫疗法（如免疫检查点阻断剂）的联合应用，或通过基因编辑引入趋化因子（如 CXCL10）增强 CAR-T 细胞募集，进一步提升临床转化潜力。
