Aerococcus spp.药敏试验方法开发及CLSI MIC折点更新：推动尿路感染精准诊疗的突破性研究

这篇综述由CLSI M45工作组主导，系统评估了174株Aerococcus spp.的药敏特性，揭示了培养基品牌（Difco/BD CA-MHB+5% LHB）对A. urinae生长的影响（14.6%不生长），建立了氨苄西林和呋喃妥因的MIC折点，调整了青霉素折点，并首次开发了青霉素等7种药物的纸片扩散法标准（使用BMHA培养基）。研究为罕见病原体AST（抗菌药敏试验）提供了关键方法学更新，将纳入CLSI M45第四版指南。

　　

ABSTRACT
Aerococcus spp.作为革兰阳性尿路致病菌，其药敏测试标准长期存在空白。CLSI M45工作组通过测试174株临床分离株（含117株A. urinae），发现14.6%的A. urinae在含5%裂解马血(5% LHB)的CA-MHB培养基中无法生长，且生长表现显著受培养基品牌（Difco优于BD）影响。研究基于药代动力学数据更新了青霉素MIC折点（敏感≤0.12 μg/mL），新增氨苄西林（≤0.25 μg/mL）和呋喃妥因（≤32 μg/mL）折点，并首次建立青霉素（10U纸片）、氨苄西林（2μg纸片）等7种药物的纸片扩散法标准。值得注意的是，头孢噻肟、头孢曲松和美罗培南因抑菌圈过大无法建立可靠折点，而甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(SXT)因培养基胸苷含量差异导致MIC与抑菌圈无相关性。

INTRODUCTION
Aerococcus属细菌（主要为A. urinae、A. sanguinicola和A. viridans）是老年UTI的重要病原体，在瑞典尿培养中检出率达0.4%，其中8%-18%可引发肾盂肾炎。血流感染病例中22%伴发心内膜炎，死亡率高达45%。MALDI-TOF MS的普及显著提高了其检出率，但现有CLSI M45第三版指南缺乏口服药（如氨苄西林）折点和纸片扩散法标准，而EUCAST方法使用的MH-F培养基和特殊纸片质量在美国不可及。

MATERIALS AND METHODS
研究采用三中心收集的158株临床分离株（100株A. urinae），平行进行CLSI标准肉汤微量稀释法(BMD)和纸片扩散法测试。BMD使用Difco CA-MHB+5% LHB，在5% CO₂中孵育20-44小时；纸片扩散采用Remel BMHA培养基。通过Breakpoint Estimation Testing Software分析数据，误差率标准遵循CLSI M23：重大误差(VME)<10%，主要误差(ME)<10%，次要误差(MI)<40%。

RESULTS

1. 培养基依赖性生长：A. urinae在Difco CA-MHB中85.4%生长（72.6%在24小时内），而BD培养基仅49.6%生长。所有菌株在BMHA上生长良好。
2. 青霉素折点调整：基于3,078株A. urinae的MIC分布（87.8%≤0.06 μg/mL），将敏感折点从≤0.12 μg/mL调整为≤0.25 μg/mL。
3. 纸片扩散标准：
   • 青霉素（10U）：抑菌圈≥31mm（敏感）对应MIC≤0.12 μg/mL，但5.3% MI
   • 氨苄西林（2μg）：ZOI≥23mm对应MIC≤0.25 μg/mL，VME率6.3%
   • 呋喃妥因（300μg）：ZOI≥17mm对应MIC≤32 μg/mL
4. 不可行方案：头孢菌素类因抑菌圈重叠（如头孢曲松敏感株ZOI 19-32mm与耐药株70%重叠）无法建立标准；SXT因羊血培养基胸苷干扰导致假耐药。

DISCUSSION
本研究首次证实A. urinae的BMD结果高度依赖培养基品牌，建议临床实验室延长孵育至44小时。纸片扩散法虽在β-内酰胺类药物中存在抑菌圈偏大（青霉素中位ZOI 38mm）的问题，但通过调整判读标准仍可实现临床可用性。值得注意的是，2μg氨苄西林纸片（非CLSI标准）的采用为口服药评估提供新思路。研究局限性在于耐药株数量不足（如仅1株万古霉素非敏感株），未来需扩大耐药监测。这些数据将推动CLSI M45第四版指南的修订，为罕见病原体药敏标准化提供范本。