综述：靶向细菌的CRISPR–Cas疗法

这篇综述系统阐述了如何利用CRISPR-Cas（规律间隔成簇短回文重复序列-相关蛋白）技术精准靶向细菌基因组，为抗感染治疗和微生物组调控提供新策略。作者详细解析了DNA/RNA靶向工具设计、噬菌体递送等关键技术突破，并探讨了其在耐药菌清除和肠道菌群编辑中的转化前景。

　　

Abstract
源自原核生物CRISPR-Cas（clustered regularly interspaced short palindromic repeats）免疫系统的技术革命，使精准切割和修饰目标核酸序列成为可能。这项技术不仅用于人类基因编辑，更可设计特异性靶向定植于人体的致病菌和共生菌，为感染治疗和微生物组调控开辟全新路径。

工程化CRISPR–Cas工具箱
通过改造CRISPR-Cas系统，研究者已开发出两类精准干预策略：DNA靶向的Cas核酸酶（如Cas9）可物理切割细菌染色体，导致致命性DNA双链断裂；而RNA靶向的Cas13效应蛋白则通过降解特定mRNA实现基因沉默。实验证实，针对金黄色葡萄球菌_mecA基因（编码青霉素结合蛋白2a）的CRISPR-Cas9系统，可使耐甲氧西林菌株恢复抗生素敏感性。

递送系统的突破
有效递送是临床应用的关键瓶颈。噬菌体载体因其天然侵染特性成为首选，改造后的λ噬菌体可将CRISPR-Cas元件递送至90%的大肠杆菌种群。接合转移系统则通过质粒在菌群间水平传播编辑器，单次给药即可实现持续编辑效果。值得注意的是，胞内屏障如限制修饰系统会降解外源DNA，采用密码子优化和抗限制酶包装策略可显著提升工具存活率。

治疗应用前景
在艰难梭菌感染模型中，靶向毒素基因_tcdB的CRISPR-Cas3显著降低宿主炎症反应。更令人振奋的是，通过编辑脆弱拟杆菌的_futC基因（调控宿主免疫识别），成功重塑了肠道菌群-宿主互作网络。当前挑战在于提高体内递送效率并避免脱靶效应，但已有4项针对尿路感染病原体的CRISPR抗菌剂进入临床前评估阶段。

这项技术正从实验室走向临床，其独特优势在于可编程性——只需更换向导RNA即可切换靶标，相比传统抗生素更具精准性。随着递送技术的持续优化，CRISPR-Cas疗法有望成为对抗超级细菌和调控生态菌群的新一代智能武器。