MicroRNA-669f-5p通过靶向脱氧胞苷磷酸脱氨酶调控TLR2/4-MyD88-NF-κB通路介导七氟醚诱发老年小鼠认知功能障碍的机制研究

针对七氟醚麻醉诱发老年患者术后认知功能障碍(POCD)的临床难题，研究人员通过生物信息学分析锁定miR-669f-5p/Dctd轴，结合动物实验和细胞模型揭示其通过TLR2/4-MyD88-NF-κB通路调控神经元凋亡与增殖的分子机制，为麻醉相关认知障碍提供新型治疗靶点。

　　

论文解读

研究背景
随着全球老龄化加剧，术后认知功能障碍(POCD)已成为困扰外科医学的重要临床问题。七氟醚作为常用吸入麻醉剂，虽具有诱导平稳、苏醒快速等优点，但流行病学数据显示老年患者接受七氟醚麻醉后POCD发生率显著升高，部分病例症状可持续6个月以上。这种以学习记忆障碍为特征的并发症，不仅延缓康复进程，更严重影响患者生活质量。尽管既往研究提示microRNAs可能参与麻醉神经毒性调控，但miR-669f-5p这一在阿尔茨海默病模型中具有同源异构体(miR-669f-3p)的分子，其在POCD中的作用机制仍是未解之谜。

研究设计与方法
遵义医科大学附属医院团队通过生物信息学筛选GEO数据库GSE95070数据集，锁定海马组织差异表达的miR-669f-5p。研究采用18月龄C57BL/6小鼠建立七氟醚暴露模型，通过Morris水迷宫评估空间认知功能；结合HT22海马神经元细胞系，运用双荧光素酶报告基因验证miR-669f-5p与靶基因Dctd的相互作用；采用Western blot、qRT-PCR和免疫荧光检测TLR2/4-MyD88-NF-κB通路蛋白表达；通过TUNEL染色和CCK-8实验分别评估细胞凋亡与增殖。

研究结果

miR-669f-5p在七氟醚诱导认知障碍中的作用
行为学实验显示，七氟醚暴露组老年小鼠逃避潜伏期延长2.3倍，目标象限停留时间减少61%，而miR-669f-5p拮抗剂可显著逆转这些异常。值得注意的是，miR-669f-5p模拟物未加重认知损伤，提示其调控存在阈值效应。

Dctd作为miR-669f-5p的直接靶点
多数据库联合预测发现Dctd、Elemod和CLEC2L三个候选靶标。实验验证显示miR-669f-5p模拟物使Dctd mRNA表达降低68%，双荧光素酶报告系统证实两者存在3'-UTR区直接结合。这种调控具有特异性，突变结合位点后荧光素酶活性恢复至对照组水平。

Dctd过表达对神经元功能的挽救效应
在HT22细胞中，Dctd过表达使七氟醚诱导的凋亡率从34.7%降至12.5%，细胞增殖活性提升1.8倍。关键的是，这种保护作用伴随TLR4蛋白表达量下降42%，表明Dctd可能通过调控先天免疫通路发挥作用。

TLR2/4-MyD88-NF-κB通路的枢纽作用
KEGG富集分析揭示该通路在POCD中显著激活。动物实验显示，Dctd过表达组小鼠海马NF-κB mRNA表达较七氟醚组降低57%，免疫荧光显示DG区MyD88荧光强度减弱3.2倍，证实该通路是miR-669f-5p/Dctd轴的下游效应器。

研究意义与展望
该研究首次阐明miR-669f-5p/Dctd/TLR2/4轴在七氟醚神经毒性中的调控机制，为临床防治POCD提供新思路。特别值得注意的是，Dctd作为核苷酸代谢关键酶，其与神经炎症通路的串扰(crosstalk)为理解代谢-免疫交互作用开辟了新视角。研究局限性在于未探讨Dctd抑制剂(如吉西他滨)对认知的影响，这将是未来转化医学研究的重要方向。团队建议后续可探索基于腺相关病毒(AAV)的靶向干预策略，并开展多中心临床研究验证生物标志物的预测价值。