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为解决羊膜(AM)机械强度低、降解快的问题,研究人员开展 AM 与细菌纳米纤维素(BC)构建双层膜的研究。结果显示 AM/BC 机械强度、生物相容性等提升,角膜缺损修复效果佳,为角膜创伤治疗提供新策略。
角膜作为眼睛的重要屏障,其透明性和完整性对视觉至关重要。然而,角膜易受化学损伤、感染等创伤,导致失明或视力障碍,全球约 600 万人受此困扰。传统羊膜(AM)虽广泛用于角膜修复,但其机械强度不足、降解快,限制了应用。因此,开发兼具高强度和生物相容性的新型角膜修复材料迫在眉睫。伊朗医科大学的研究人员开展了相关研究,构建了 AM 与细菌纳米纤维素(BC)的双层膜(AM/BC),发现其在角膜缺损修复中效果显著,该研究发表在《Carbohydrate Polymer Technologies and Applications》。
研究主要采用了以下关键技术方法:制备脱细胞羊膜并进行表征,通过静态培养葡糖醋杆菌合成 BC 并进行傅里叶变换红外光谱(FTIR)和扫描电子显微镜(SEM)表征,将 AM 与 BC 冷压成均匀双层膜,进行拉伸强度、缝合保留等生物力学测试,通过 MTT 法、SEM 和 DAPI 染色评估细胞相容性,利用圆盘扩散法和 SEM 进行抗菌性能检测,在兔角膜缺损模型上进行体内实验,通过组织学染色和实时定量 PCR(qPCR)评估愈合情况。
研究结果
双层膜的制备与表征
脱细胞羊膜经处理后无细胞残留,保留细胞外基质(ECM)。BC 呈现纳米纤维网络结构,纤维直径约 43±8 nm,厚度约 21.72 μm。AM/BC 通过物理键合形成均匀双层膜,厚度 60-100 μm,FTIR 显示其保留 AM 和 BC 的特征峰,SEM 显示两层紧密贴合无间隙。
生物力学性能
干燥状态下,AM/BC 的拉伸强度(38.5 MPa)、断裂伸长率(18.2%)和杨氏模量(59 MPa)均显著高于 AM 和 BC;湿润状态下,AM/BC 的拉伸强度达 80 MPa,断裂伸长率 165.33%,缝合保留强度 0.97 N,机械性能优势明显。
透明性与降解率
AM/BC 湿润时具有良好透明性,字母可清晰辨认。25 天降解实验显示,AM 降解约 58%,而 AM/BC 仅降解 18%,降解率显著降低。
细胞相容性
MTT 显示,AM/BC 组细胞存活率在第 7 天接近 125%,显著高于其他组。SEM 和 DAPI 染色表明,角膜上皮细胞在 AM/BC 表面黏附、分布良好,AM 表面细胞更多。
抗菌性能
圆盘扩散试验显示 AM、BC 和 AM/BC 均无抑菌圈,但 SEM 发现 AM 表面无细菌附着,BC 表面有细菌,表明 AM 通过抑制细菌黏附发挥抗菌作用。
体内实验
宏观观察显示,AM/BC 组角膜透明度改善,新生血管减少。组织学染色(H&E 和 Masson’s trichrome)显示,AM/BC 组角膜上皮在第 21 天完全再上皮化,胶原沉积减少且排列整齐。qPCR 显示,AM/BC 组炎症因子 IL-6 表达降低,与角膜愈合相关的 TGF-β3、MMP-1、MMP-2 及 COLⅠ、COLⅢ 基因表达上调。
结论与讨论
本研究开发的 AM/BC 双层膜通过结合 AM 的生物活性和 BC 的高强度,显著改善了传统羊膜的机械性能和降解特性,同时保持透明性和生物相容性。其通过促进角膜上皮再生、减少炎症和胶原沉积,实现了角膜缺损的有效修复。与现有合成材料相比,AM/BC 兼具天然 ECM 成分和纳米结构优势,为角膜组织工程提供了一种极具潜力的新型支架材料,有望解决角膜移植供体短缺问题,为临床角膜创伤治疗开辟新路径。未来可进一步优化其规模化制备和长期性能,推动临床转化应用。