基于基质耐受性抗体与聚集诱导发光标记的双策略增强型侧流免疫层析技术实现西地那非的高灵敏检测

为解决食品中非法添加西地那非（Sild）的监管难题，研究人员开发了一种双策略增强型侧流免疫层析技术（LFIA）。通过筛选高基质耐受性单克隆抗体（mAb-3C11）并合成聚集诱导发光荧光微球（AIEFMs）作为标记物，构建的LFIA@AIEFMs检测限低至0.15 ng mL–1，较传统胶体金法灵敏度提升4.4倍。该技术成功应用于保健酒检测，回收率78.8%-130.4%，与LC-MS结果一致，为现场快速筛查提供可靠工具。

　　

西地那非（Sild）作为治疗勃起功能障碍的处方药，近年来频繁被非法添加至保健酒中，消费者在不知情下摄入可能引发心血管风险。尽管液相色谱-质谱（LC-MS）等仪器检测方法精度高，但其复杂的操作流程和高成本难以满足基层监管需求。传统侧流免疫层析技术（LFIA）虽便捷，但受限于抗体基质耐受性和标记物灵敏度，难以实现痕量检测。

针对这一技术瓶颈，江西省农业科学院的研究团队在《Food Bioscience》发表论文，通过开发高基质耐受性单克隆抗体（mAb-3C11）和新型聚集诱导发光荧光微球（AIEFMs），构建了双策略增强型LFIA。研究采用杂交瘤技术筛选抗体，通过紫外光谱和竞争ELISA验证抗原-蛋白偶联效率；利用AIE特性合成超亮荧光微球，结合抗体优化实现信号放大。

Reagents and apparatus
研究选用西地那非及其7种类似物作为靶标，通过BSA/OVA蛋白偶联制备免疫原，采用紫外光谱和SDS-PAGE验证偶联效果。

Conjugate identification
紫外光谱显示偶联物（Sild-BSA/Sild-OVA）在280 nm处出现特征吸收峰偏移（图S1），竞争ELISA证实mAb-3C11对Sild半数抑制浓度（IC₅₀）达0.43 ng mL^–1，且对保健酒基质干扰表现出显著耐受性。

Conclusion
该研究创新性地将基质耐受性抗体与AIEFMs标记结合，使LFIA@AIEFMs检测限降至0.15 ng mL^–1，较商品化乳胶微球标记方法灵敏度提升4.4倍。实际样本检测回收率78.8%-130.4%（变异系数<15%），与LC-MS结果高度一致。这一技术突破不仅为保健食品非法添加监管提供高效工具，其双策略设计思路也为其他小分子污染物检测提供了范式。

研究意义在于：首次在LFIA中同步优化抗体基质耐受性与标记物亮度，解决了传统方法因基质效应需高倍稀释导致的灵敏度损失问题；AIEFMs的应用克服了传统荧光染料的浓度淬灭效应，为超灵敏现场检测开辟新途径。该成果获得国家科学技术奖培育项目（20223AEI91011）和江西省农业产业体系（JXARS-03）支持，具备明确的产业化前景。