血管化复合组织异体移植慢性排斥反应小鼠模型的建立及其免疫病理机制研究

为解决血管化复合组织异体移植(VCA)中慢性排斥反应缺乏可靠动物模型的问题，研究人员通过构建MHC错配小鼠模型，结合CD8-/-受体和CD4+T细胞瞬时清除策略，成功模拟了临床慢性排斥的免疫学特征（如DSA升高、C4d沉积）和组织病理改变（纤维化、血管病变）。该研究为开发新型抗排斥疗法提供了关键实验平台。

　　

论文解读

在现代医学的奇迹清单上，血管化复合组织异体移植(Vascularized Composite Allotransplantation, VCA)无疑占据着耀眼的位置——这项技术让失去面部、四肢甚至生殖器的患者重获新生。然而，与所有移植医学的进步相伴的，是免疫系统对"外来者"的无情攻击。尽管急性排斥反应已通过免疫抑制剂得到部分控制，慢性排斥反应却像一把缓慢切割的钝刀，逐渐侵蚀着移植组织的生命力。临床数据显示，超过80%的手部和面部移植患者最终会遭遇慢性排斥，其特征性的血管病变和纤维化导致移植组织功能丧失，而科学家们至今仍缺乏有效对策。

造成这一困境的核心原因，是慢性排斥反应机制的复杂性。与T细胞主导的急性排斥不同，慢性排斥涉及B细胞活化、供体特异性抗体(Donor-Specific Antibody, DSA)产生、补体激活等多重免疫攻击。更棘手的是，科学界长期缺乏能准确模拟人类慢性排斥的动物模型——既往研究多通过减少免疫抑制剂剂量来延长移植物存活，但这本质上仍是急性排斥的延缓而非真正的慢性排斥过程。

来自美国罗斯威尔公园综合癌症中心的研究团队在《Scientific Reports》发表的研究中，创新性地构建了两类小鼠慢性VCA排斥模型。通过精心设计主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex, MHC)错配方案——完全错配的BALB/c→C57BL/6 CD8^-/-（慢性KO模型）和单MHC II差异的bm12→C57BL/6 CD8^-/-（慢性BM12模型），结合CD4⁺T细胞瞬时清除策略，成功再现了人类慢性排斥的关键特征。这些模型不仅展示出皮肤挛缩、毛发脱落等肉眼可见的改变，更在分子层面捕捉到DSA升高、补体C4d沉积等抗体介导排斥(AMR)的标志性事件。

研究采用的核心技术包括：异位小鼠后肢移植手术（通过非缝合袖套技术连接血管）、流式细胞术分析骨髓和脾脏免疫细胞亚群（重点关注B220⁺CD19⁺浆细胞和CD4⁺记忆T细胞）、ELISA检测循环C4d水平，以及组织病理学评估（采用Banff 2022分级标准分析皮肤和血管病变）。所有实验均使用Jackson实验室提供的9-10周龄雌鼠，并通过伦理审查。

研究结果揭示多重突破性发现：

模型构建与存活分析
完全MHC错配的慢性KO模型移植肢中位存活期达14天，显著长于急性排斥组的7天；而单MHC II差异的慢性BM12模型表现更为突出——65%移植物可维持7周无肉眼排斥迹象。这种差异印证了MHC错配程度对排斥进程的调控作用。

B细胞免疫风暴
流式数据揭示慢性排斥模型中爆发性的B细胞活化：骨髓中浆细胞(B220⁺CD19⁺CD138⁺)比例较急性排斥组增加3倍，脾脏中活化B细胞(MHC II⁺)扩张2倍。尤为关键的是，通过快速离体细胞孵育实验证实，慢性模型受体血浆能使供体脾细胞IgG⁺率升高5-8倍，直接证明DSA的致病作用。

补体系统激活
ELISA检测显示慢性模型循环C4d水平较对照组升高2.5倍，这一发现与临床AMR患者的补体激活特征高度吻合，为模型