被动 eDNA 采样监测池塘养殖斑节对虾(Penaeus monodon)养殖系统中传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的研究

【字体: 时间:2025年05月16日 来源:Aquaculture 3.9

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  为解决虾类养殖中病原体监测成本高、效率低的问题,研究人员开展被动 eDNA 采样监测传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的研究。通过不同时长采样及农场规模验证,发现 24 小时采样效果最佳,eDNA 与组织检测一致性达 95%,为水产病害监测提供新方法。

  
在全球虾类养殖的版图上,病害始终是悬在产业头顶的达摩克利斯之剑。尤其是传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV),作为世界动物卫生组织(WOAH)列出的重要病原体,其在斑节对虾(Penaeus monodon)养殖中的潜在威胁不容忽视。传统的病原体监测依赖虾体组织采样,面对高密度养殖池塘(单池虾群可达数十万尾),这种方法不仅需要耗费大量人力物力,频繁的采样还可能对虾群造成应激,甚至引发交叉污染。如何在不干扰养殖生态的前提下,实现病原体的高效、精准监测,成为水产养殖业亟待突破的技术瓶颈。

来自国外研究机构的科研团队聚焦这一难题,在《Aquaculture》发表研究论文,探索被动环境 DNA(eDNA)采样技术在虾塘 IHHNV 监测中的应用潜力。研究旨在验证被动 eDNA 采样对 IHHNV 的检测效能,并评估其作为组织采样替代方法的可行性,为水产病害监测模式的革新提供科学依据。

研究主要采用以下关键技术方法:一是被动 eDNA 采样技术,使用混合纤维素酯(MCE)膜过滤器(0.22 μm),置于带孔塑料外壳中,通过不同时长(1-24 小时)浸没于虾塘水体采集环境核酸;二是实时定量 PCR(qPCR)技术,针对 IHHNV 基因组设计特异性引物和探针,同时以斑节对虾 Dicer-1 基因作为内参,确保检测体系的可靠性;三是农场规模验证实验,在 22 个商业池塘中部署 24 小时浸没的被动采样器,同步采集虾体组织样本(39 尾 / 池,混合成 13 个样本池),进行平行检测分析。

3.1 浸没时长对检测效果的影响


通过在 5 个池塘中部署不同浸没时长(1、2、4、6、24 小时)的被动采样器,发现 IHHNV 检测量随时间显著增加。24 小时浸没的 eDNA 样本病毒载量显著高于 1 小时样本(p=0.046),且与虾体组织中的病毒载量呈现强相关性(R2=0.57-0.98)。尽管不同池塘的基线病毒水平存在差异(如池塘 A 的组织病毒载量显著低于其他池塘),但整体趋势表明,延长浸没时间可提高检测灵敏度,24 小时成为平衡效率与准确性的理想时长。

3.2 农场规模监测的有效性验证


在 22 个商业池塘中,24 小时被动 eDNA 采样与虾体组织检测的阳性一致性达 95%(21/22 池塘)。仅 1 个池塘出现组织阳性而 eDNA 阴性的情况,且该池塘的组织病毒载量低于 10 拷贝 /μL,提示低载量时 eDNA 检测可能接近极限。进一步分析显示,eDNA 病毒载量与组织载量呈强相关(R2=0.95),且符合 Michaelis-Menten 模型,表明 eDNA 检测在一定范围内可有效反映宿主感染水平。

3.3 水质参数与检测结果的关联


广义线性模型分析表明,虾体组织病毒载量是 eDNA 检测结果的最显著预测因子(p<0.001),而晨间 pH 值与 eDNA 检测呈正相关(p=0.025),其他水质参数(如温度、溶解氧、盐度等)无显著影响。这提示在实际应用中,需结合水质数据优化检测结果的解读。

研究结论表明,被动 eDNA 采样技术在虾塘 IHHNV 监测中展现出显著优势:24 小时浸没的采样策略可实现病毒载量的高效捕获,与传统组织采样相比,具有成本低、操作简便、非侵入性等特点,且检测结果与宿主感染水平高度吻合。尽管在低病毒载量场景下的灵敏度仍需进一步验证,但该技术为大规模、长期的水产病原体监测提供了全新范式。未来若能结合 eRNA(环境 RNA)检测以评估病毒活性,并建立标准化的采样与数据分析流程,被动 eDNA 技术有望成为水产养殖生物安全体系的核心工具,助力实现病害的早期预警与精准防控,为全球虾类养殖的可持续发展提供关键技术支撑。

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