草鱼源高毒力柱状黄杆菌Ci2323的分离及其减毒活疫苗候选株的研发

针对柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)引发的草鱼柱状病(CD)造成重大经济损失的问题，研究人员通过分离高毒力菌株Ci2323，利用利福平传代法获得减毒株CiR6。该突变株表现出不成熟生物膜形成、黏附性增强及T9SS效应蛋白分泌减少等特征，经浸泡免疫可使草鱼对野生型攻毒产生83.66% (2周)和71.76% (4周)的相对存活率(RPS)。研究为水产养殖中柱状病的防控提供了新型疫苗候选策略。

　　

柱状病(Columnaris disease, CD)是淡水养殖业面临的重大威胁，由革兰氏阴性菌柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)引发，可导致鲢鱼、鲶鱼等经济鱼种出现鳃部溃烂和皮肤坏死，每年造成巨额经济损失。该病原的致病核心在于其Ⅸ型分泌系统(T9SS)介导的毒力因子传递，以及生物膜形成带来的强环境抗性。传统抗生素治疗易引发耐药性，而生物膜的顽固性更使得病原难以根除。针对这一难题，湖北省重点研发计划支持的研究团队从广东佛山患病草鱼(Ctenopharyngodon idella)皮肤病灶中分离出高毒力菌株Ci2323，通过利福平梯度传代获得减毒候选疫苗CiR6，相关成果发表于《Aquaculture》。

研究采用临床样本分离、全基因组测序(平均核苷酸一致性ANI 99.29%)、抗生素敏感性测试等技术，结合利福平传代诱导突变。通过斑马鱼幼虫黏附实验、生物膜成熟度分析、分泌蛋白组比较及基因组差异鉴定，评估了CiR6的减毒机制与免疫效果。

Strain isolation of Flavobacterium spp.
从12-14°C环境下患病的1.1kg草鱼眼周病灶分离出Ci2323，该菌株在含妥布霉素(1.0μg/mL)的Shieh琼脂上呈现典型黄色根状菌落，经鉴定为柱状黄杆菌F2S17近缘株。

Isolation of the bacterial strain Ci2323
全基因组分析显示Ci2323对氟苯尼考、四环素敏感但耐甲氧西林。利福平传代获得短根状突变株，其中形成不成熟生物膜的CiR6减毒效果最显著。

Discussion
CiR6的减毒特征包括：黏附性增强但生物膜发育受阻，分泌蛋白减少（特别是T9SS效应蛋白TssD和13kDa假设蛋白），基因组缺失gldJ、porU及滑动运动相关蛋白C端结构域。浸泡免疫实验显示，接种5.5×10³ CFU/mL CiR6的草鱼，在5倍LD₅₀野生型攻毒后，2周和4周RPS分别达83.66%和71.76%，同时IgM、IgZ和IL-10转录水平在4周达峰。

该研究首次阐明利福平诱导的柱状黄杆菌减毒株可通过改变T9SS功能与生物膜成熟度实现免疫保护，为水产疫苗开发提供了新思路。Thusyakaanth Sivaranjan等学者指出，CiR6的基因组变异模式为理解细菌毒力衰减机制提供了分子标记，其高效浸泡免疫方式更适用于大规模养殖场景。研究成果对控制柱状病流行、减少抗生素滥用具有双重意义。