编辑推荐：
CAR-T 细胞疗法因生产流程复杂等限制可及性，研究人员探索无标记监测技术。借助 405nm 激光流式细胞仪，发现 NADH、FAD 自发荧光与 T 细胞活化标记 CD25 及乳酸水平相关，FAD 或可确定生产终点，为自动化监测奠定基础。
癌症免疫治疗领域正经历一场革命性突破，CAR-T（嵌合抗原受体 T 细胞）疗法如同精准制导的生物导弹，在血液肿瘤治疗中展现出惊人潜力。然而，这项被誉为 "活的药物" 的疗法却面临着生产瓶颈：复杂的手工操作流程、有限的自动化设备以及对专业技术人员的依赖，导致其难以大规模普及。想象一下，在封闭的生物反应器中，T 细胞如同微小的工厂，如何实时监控它们的活化与增殖状态？传统的标记技术需要引入外源性物质，可能干扰细胞功能，而紫外（UV）激光虽能激发细胞自发荧光，却存在基因毒性风险，这就像用一把双刃剑去测量细胞的 "健康脉搏"，显然并非理想之选。
在这样的背景下，来自相关研究机构的科研团队瞄准了细胞代谢的 "信号灯"—— 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（还原型，NADH）和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）。这两种参与糖酵解和氧化磷酸化（OXPHOS）的内源性分子，在受到特定波长激发时会发出自发荧光，如同细胞代谢状态的 "天然指示剂"。研究团队发表于《Cytotherapy》的这项研究，正是希望通过无标记技术，利用 405nm 可见光替代有害的紫外光，实现对 CAR-T 细胞生产过程的实时监测。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：
- 流式细胞术：配备 405nm 紫光激光的流式细胞仪，用于检测 T 细胞中 NADH 和 FAD 的自发荧光强度（MFI）。
- 细胞培养与激活：使用 G-Rex 生物反应器培养 CAR-T 细胞，通过检测细胞活化标记物 CD25、细胞外乳酸水平及细胞增殖速率，关联自发荧光信号变化。
- 数据相关性分析：建立 FAD 荧光强度变化率与细胞增殖速率的数学关系模型，确定生产终点的潜在指标。
NADH 和 FAD 自发荧光可被 405nm 激光流式细胞仪检测
传统紫外激光流式细胞仪虽能测量免疫细胞的自发荧光，但紫外光的基因毒性限制了其在 CAR-T 生产中的应用。研究发现，405nm 紫光激光同样能有效激发 NADH 和 FAD 的自发荧光，且避免了紫外光的潜在危害。这一替代方案为封闭系统中的实时监测打开了新窗口。
自发荧光强度与 T 细胞活化状态显著相关
在 T 细胞活化后的前三天，研究人员观察到 NADH 和 FAD 的自发荧光强度显著升高，且与 T 细胞活化标记物 CD25 的上调、培养上清中乳酸水平的增加呈正相关。这表明，这两种分子的荧光信号可作为无标记生物标志物，实时反映细胞的活化程度 —— 就像通过监测工厂的用电量来判断生产线的繁忙程度。
FAD 荧光变化率可预测 CAR-T 细胞生产终点
通过 G-Rex 生物反应器的动态培养实验，研究团队发现 FAD 平均荧光强度（MFI）的变化速率与 T 细胞增殖速率之间存在明确关联。当 FAD 荧光变化率达到最小转折点时，恰好对应细胞增殖的关键节点，这一发现为确定 CAR-T 细胞的最佳收获时间提供了客观依据，如同为细胞生产过程安装了精准的 "计时器"。
可见光激发技术的安全性与应用潜力
相较于紫外光和双光子显微镜技术，405nm 可见光不仅避免了基因毒性，还突破了成像深度和细胞数量的限制，更适合动态悬浮培养的 CAR-T 细胞监测。这一技术有望整合到现有的封闭自动化系统中，实现生产过程的实时、无干扰监控。
这项研究为 CAR-T 细胞疗法的工业化生产提供了关键的技术突破：无标记的自发荧光监测技术，尤其是 FAD 作为生物标志物的应用，不仅解决了传统方法的安全性和操作复杂性问题，更有望推动 CAR-T 生产向全自动化、实时监控的方向迈进。想象未来的细胞生产车间，无需频繁的人工取样，通过内置的光学传感器即可实时追踪细胞状态，这将大幅提升生产效率，降低人为误差，让更多癌症患者能够及时受益于这种革命性疗法。正如研究结论所述，405nm 可见光激发的自发荧光技术，正为 CAR-T 细胞治疗的规模化应用铺就一条精准、安全的新路径。
