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肝细胞癌（HCC）死亡率高，现有疗法响应率有限。研究人员探讨力丝菌素（Lysionotin）对肝癌的作用，发现其通过抑制 mTOR-AKT 通路激活自噬诱导细胞凋亡，且与 mTOR 抑制剂 RAPA 联用可增强抗肿瘤效果，为肝癌治疗提供新方向。
肝癌是威胁人类健康的重大杀手，其中肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）占原发性肝癌的 90%，其恶性程度高、进展迅速，尽管手术切除、介入治疗、分子靶向药物及免疫治疗等手段不断发展，但临床疗效仍有限，患者总体预后较差。寻找新的分子靶点和治疗策略成为肝癌研究的迫切需求。天然药物因其多靶点、低毒性的特点，成为抗癌药物开发的重要来源。力丝菌素（Lysionotin）作为一种天然植物成分，此前研究发现其可通过激活 Hippo 通路克服肝癌对索拉非尼的耐药性，并增强内质网应激介导的促凋亡通路敏感性，但关于其诱导肝癌细胞凋亡的具体机制仍不明确。在此背景下，滨州医学院中医药学院等机构的研究人员开展了相关研究，探究力丝菌素对肝癌细胞自噬及凋亡的影响，该研究成果发表在《Discover Oncology》。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：通过 RNA 测序（RNAseq）分析力丝菌素处理后 HCC 细胞的转录组变化，筛选差异表达基因并进行功能富集分析；利用透射电子显微镜（TEM）观察自噬体形态；借助激光共聚焦显微镜结合 mCherry-EGFP-LC3B 系统检测自噬流；运用免疫印迹（Western blot）技术检测自噬相关蛋白（如 LC3、ATG12、Beclin-1、P62）及 mTOR-AKT 通路关键分子的表达水平；采用 Hoechst 33258 染色观察细胞凋亡形态；通过添加自噬抑制剂（3-MA、CQ）和 mTOR 抑制剂（RAPA）、激活剂（1485）进行功能验证实验。
3.1 力丝菌素调控 HCC 细胞中与自噬激活相关的多条分子通路
RNA 测序结果显示，力丝菌素处理 Hep3B 细胞后，共检测到 1305 个差异表达基因（718 个下调，587 个上调）。基因本体论（GO）富集分析表明，差异基因主要富集于自噬体相关的细胞组分（CC）、蛋白磷酸酶活性等分子功能（MF）及整合应激反应信号、内质网应激相关凋亡信号等生物学过程（BP）。京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析显示，MAPK 信号通路、癌症相关通路及自噬相关信号通路显著富集。进一步分析发现，自噬相关基因（如 ATG12、Beclin-1、LC3B、P62）表达显著变化，PCR 实验验证了这些结果，提示力丝菌素可能通过激活自噬通路抑制 HCC 细胞生长。
3.2 力丝菌素诱导 HCC 细胞自噬
透射电子显微镜观察显示，力丝菌素处理后 Hep3B 细胞内自噬体数量显著增加。激光共聚焦显微镜检测 mCherry-EGFP-LC3B 转染细胞发现，力丝菌素处理后红色和黄色 LC3 斑点增多，表明自噬流激活。免疫印迹结果显示，力丝菌素可显著上调 LC3-II、ATG12、Beclin-1 蛋白表达，下调 P62 蛋白水平，且呈浓度和时间依赖性，进一步证实力丝菌素诱导 HCC 细胞自噬。
3.3 力丝菌素通过激活自噬促进肝癌细胞凋亡
通过联用自噬抑制剂 3-MA（抑制自噬体形成）和 CQ（抑制自噬体与溶酶体结合），发现力丝菌素诱导的细胞凋亡率显著降低，细胞存活率提高，表明自噬激活是力丝菌素诱导 HCC 细胞凋亡的关键环节。免疫印迹显示，力丝菌素可抑制 mTOR-AKT 通路磷酸化水平（p-mTOR、p-AKT 表达下调），提示其可能通过调控该通路诱导自噬。
3.4 力丝菌素通过抑制 AKT-mTOR 通路激活自噬
mTOR 抑制剂 RAPA 与力丝菌素联用可进一步下调 p-mTOR、p-AKT 表达，上调 LC3-II 水平，并显著增强细胞凋亡率；而 mTOR 激活剂 1485 与力丝菌素联用则逆转上述效应，证实力丝菌素通过抑制 AKT-mTOR 通路激活自噬，进而诱导 HCC 细胞凋亡。
结论与讨论
本研究表明，力丝菌素通过抑制 AKT-mTOR 信号通路激活自噬，从而诱导肝癌细胞凋亡，且与 mTOR 抑制剂 RAPA 联用具有协同抗肿瘤效应。该研究不仅揭示了力丝菌素抗肝癌的新机制，也为临床联合应用天然药物与靶向药物提供了理论依据。然而，研究仍存在一定局限性，如力丝菌素的直接分子靶点尚未明确，其在动物模型中的疗效及对肿瘤微环境的影响有待进一步验证。未来需通过 CRISPR/Cas9 筛选、免疫 competent 模型评估等深入探究其作用机制，为临床转化提供更充分的实验基础。力丝菌素作为潜在的天然抗癌药物，其与现有靶向疗法的联合应用策略有望为肝癌治疗开辟新途径。
