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为探究 MCL-1 在犬肝细胞癌（HCC）中的预后意义，研究人员通过蛋白质免疫印迹（Western blotting）和免疫组织化学（IHC）检测 MCL-1 表达，分析其与临床病理参数的关联。发现 HCC 组织中 MCL-1 显著上调，且与转移、肿瘤大小及预后不良相关，提示其可作为预后标志物。
犬类肝脏肿瘤的诊疗困境：探寻 MCL-1 在肝细胞癌中的关键价值
在犬类肿瘤疾病谱中，原发性肝脏肿瘤虽仅占所有恶性肿瘤的不足 1.5%，但肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）作为最常见的肝原发性肿瘤，约占犬肝胆肿瘤的 77%。这类肿瘤存在显著的异质性，其中弥漫型和结节型 HCC 常因多肝叶受累、高达 93% 的转移率而难以通过手术根治，即便采用吉西他滨、卡铂等化疗手段也未能显著延长生存期。目前，犬 HCC 的预后评估主要依赖肿瘤形态学分型，但缺乏特异性分子标志物，且针对凋亡调控异常这一肿瘤核心特征的研究仍不深入。
凋亡通路的失衡是肿瘤发生发展的重要机制，其中 B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lymphoma 2, BCL-2）家族蛋白通过调控内源性凋亡途径维持细胞稳态。髓系细胞白血病 - 1（myeloid cell leukemia-1, MCL-1）作为 BCL-2 家族的抗凋亡成员，其在人类多种癌症中过表达并与预后不良相关，但在犬 HCC 中的作用尚未明确。为填补这一空白，首尔国立大学兽医学院的研究团队开展了相关研究，旨在验证 MCL-1 在犬 HCC 中的表达特征及其作为预后标志物的潜力。该研究成果发表于《BMC Veterinary Research》，为犬 HCC 的精准诊疗提供了新方向。
研究人员采用了多维度的研究策略：首先，从首尔国立大学动物医院收集了 5 例正常犬肝脏组织、30 例非肿瘤性肝病组织及 30 例 HCC 组织，通过蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测 MCL-1 蛋白表达，并利用免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）对不同组织中的 MCL-1 染色强度进行半定量分析。同时，结合临床病理数据（包括肿瘤大小、转移状态、组织学分型等），系统评估 MCL-1 表达与预后指标的相关性。
关键技术方法
- 组织样本采集与处理：正常肝组织来自健康比格犬，HCC 及非肿瘤性肝病组织来源于 2018-2024 年间接受手术的 client-owned 犬，所有样本经组织病理学确诊，部分样本冻存于 - 80℃用于蛋白分析。
- 蛋白质免疫印迹：选取 4 对正常与 HCC 组织，通过 RIPA 缓冲液提取蛋白，利用 BCA 法定量后进行 SDS-PAGE 电泳及转膜，以兔抗 MCL-1 多克隆抗体（1:1500）和鼠抗 β- 微管蛋白单克隆抗体（1:3000）进行免疫反应，ECL 试剂显影后分析蛋白表达差异。
- 免疫组织化学染色：石蜡切片经抗原修复、内源性过氧化物酶阻断后，以兔抗 MCL-1 抗体（1:700）孵育过夜，通过二氨基联苯胺（DAB）显色，采用半定量评分系统（染色强度 × 阳性细胞比例）评估 MCL-1 表达水平，以受试者工作特征曲线（ROC）确定临界值（187 分）区分高低表达组。
- 生存分析与统计方法：运用 Kaplan-Meier 法绘制无病生存期（disease-free survival, DFS）和总生存期（overall survival, OS）曲线，通过 Log-rank 检验比较组间差异，并采用 Cox 比例风险回归模型进行多因素分析。
研究结果解析
1. MCL-1 在犬 HCC 组织中显著过表达
蛋白质免疫印迹结果显示，HCC 组织中 MCL-1 蛋白表达水平较正常肝组织显著升高（P=0.029）。免疫组织化学染色进一步证实，正常肝组织均呈 MCL-1 低表达，而非肿瘤性肝病组织中 23% 出现中等强度表达，HCC 组织中高达 70% 呈高表达（P<0.001），且染色强度随肿瘤恶性程度增加而递增。这一结果与人类 HCC 研究一致，提示 MCL-1 在犬 HCC 发生发展中可能扮演关键角色。
2. MCL-1 高表达与临床病理参数的相关性
在 HCC 样本中，MCL-1 高表达与肿瘤直径 > 5 cm（P=0.046）及转移状态（P=0.034）显著相关，而与年龄、肿瘤位置、肝酶水平（ALT、AST 等）无明显关联。值得注意的是，结节型和弥漫型 HCC 虽样本量较少（分别为 4 例和 1 例），但均表现为 MCL-1 高表达，暗示其可能与更具侵袭性的生物学行为相关。
3. MCL-1 高表达预示预后不良
生存分析显示，MCL-1 高表达组的中位无病生存期（20 个月 vs. 未明确）和中位总生存期（24 个月 vs. 未明确）均显著短于低表达组（P=0.006 和 P=0.031）。多因素 Cox 回归分析表明，在调整肿瘤大小和转移因素后，MCL-1 高表达仍为独立的预后不良因子（风险比 = 5.853, 95% CI:1.068-32.048, P=0.042），证实其作为预后标志物的独立价值。
研究结论与意义
本研究首次系统揭示了 MCL-1 在犬 HCC 中的表达特征及预后价值：MCL-1 蛋白在 HCC 组织中呈显著过表达，其水平与肿瘤进展、转移及不良预后密切相关，且独立于传统病理指标。这一发现不仅为犬 HCC 的预后评估提供了新的分子标志物，也为靶向治疗策略提供了潜在靶点 —— 鉴于 MCL-1 在凋亡调控中的核心作用及其与索拉非尼（sorafenib）等药物的相互作用，未来可探索以 MCL-1 为靶点的分子靶向治疗，或联合传统化疗以克服肿瘤耐药。
尽管研究存在样本量较小、新鲜冰冻组织有限等局限性，但其首次在兽医领域建立了 MCL-1 与 HCC 预后的直接关联，为后续开展大样本验证及机制研究奠定了基础。随着精准兽医医学的发展，基于分子标志物的个体化诊疗模式将成为犬肿瘤治疗的重要方向，而 MCL-1 的发现无疑为这一进程提供了关键切入点。
