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胃癌（GC）预后差且缺乏高效筛查标志物。本研究聚焦 tRNA 衍生片段（tRFs），鉴定出 tRF-29-79MP9P9NH525（tRF-29），发现其在胃癌组织和血浆中低表达，可通过结合 Ago2 下调 KIF14 mRNA，调控 AKT/P27 通路抑制肿瘤，为胃癌诊疗提供新方向。
胃癌是全球高发恶性肿瘤，其早期症状隐匿，多数患者确诊时已进展至中晚期，且缺乏特异性生物标志物用于筛查和预后评估。传统肿瘤标志物如癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）等诊断效能有限，开发新型分子标志物迫在眉睫。非编码 RNA（ncRNA）领域的研究揭示，tRNA 衍生片段（tRFs）作为一类新兴小 RNA，在肿瘤发生发展中发挥关键调控作用，但其在胃癌中的具体机制尚不明晰。
为探索胃癌诊疗新策略，宁波大学及其附属医院的研究团队开展了相关研究。团队鉴定出一种名为 tRF-29-79MP9P9NH525（tRF-29）的 tRNAValACC衍生片段，发现其在胃癌组织和血浆中显著低表达，并深入解析其抑癌机制。该研究成果发表于《Cell Death Discovery》，为胃癌的早期诊断和靶向治疗提供了重要科学依据。
研究主要采用以下关键技术方法：
- 样本队列：收集 532 例组织样本（包括健康对照、良性病变、癌前病变、早期及进展期胃癌）和 256 例血浆样本，构建训练集与验证集。
- 分子检测：设计特异性发夹环逆转录引物，通过 qRT-PCR 检测 tRF-29 表达；利用荧光原位杂交（FISH）定位 tRF-29 亚细胞分布。
- 功能验证：通过 EdU、细胞克隆、Transwell 实验及流式细胞术，检测 tRF-29 对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响；建立 NOD-SCID 小鼠 xenograft 模型，验证 tRF-29 体内抑癌作用。
- 机制研究：结合 RNA 测序、双荧光素酶报告基因实验、Western blot、免疫组化（IHC）及 RNA 结合蛋白免疫沉淀（RIP）技术，探究 tRF-29 与 Ago2 及 KIF14 的相互作用机制。
研究结果
1. tRF-29 的诊断与预后价值
- 组织表达：tRF-29 在进展期胃癌（AGC）组织中显著下调，且从健康对照到 AGC 呈现梯度降低趋势。受试者工作特征曲线（ROC）显示，其区分 AGC 与健康对照的曲线下面积（AUC）达 0.970，敏感性和特异性分别为 93.3% 和 93.6%。
- 血浆检测：胃癌患者术前血浆 tRF-29 水平低于术后及健康对照，与 CEA、CA125 等传统标志物联合时，诊断 AUC 提升至 0.827，且低水平 tRF-29 与患者总生存期（OS）缩短显著相关。
2. tRF-29 抑制胃癌细胞恶性表型
- 体外实验：过表达 tRF-29 可抑制 AGS、HGC-27 细胞增殖，阻滞细胞周期于 G0/G1 期，减少迁移和侵袭能力；敲低 tRF-29 则促进细胞恶性行为。
- 体内实验：tRF-29 agomir 处理的 HGC-27 细胞在小鼠体内形成的肿瘤体积和重量呈剂量依赖性减小，且不影响小鼠体重。
3. tRF-29 调控 KIF14/AKT 通路的机制
- 靶向 KIF14：tRF-29 与 KIF14 mRNA 的 3' 非翻译区（3'UTR）互补结合，通过 Ago2 介导其降解。双荧光素酶报告实验证实两者直接相互作用，且 KIF14 在胃癌组织和细胞中高表达，与肿瘤分化程度、大小显著相关。
- 调控 AKT/P27 通路：tRF-29 通过下调 KIF14，抑制 AKT 磷酸化（p-AKT），上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 P27，同时减少基质金属蛋白酶 - 2（MMP-2）表达，从而抑制肿瘤进展。
- 分子互作验证：RIP 实验证实 tRF-29 与 Ago2 直接结合，且 Ago2 可富集 KIF14 mRNA，提示 tRF-29 通过形成 Ago2/tRF-29/KIF14 mRNA 复合物发挥作用。
研究结论与意义
本研究首次系统揭示 tRF-29 在胃癌中的双重角色：作为诊断标志物，其组织和血浆水平可有效区分胃癌与癌前病变及正常组织，联合传统标志物显著提升诊断效能；作为抑癌因子，其通过 Ago2 依赖的 KIF14/AKT/P27 通路抑制肿瘤细胞增殖和转移。该研究不仅拓展了 tRFs 在胃癌中的功能机制，也为临床开发新型分子诊断工具和靶向药物提供了潜在靶点。未来需进一步验证 tRF-29 在大规模队列中的稳定性，并探索其作为治疗性核酸药物的递送策略，推动基础研究向临床转化。
