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为解决传统 CTC 检测局限于上皮癌、易受表型变化影响等问题，研究人员开展靶向癌胚硫酸软骨素（ofCS）的 CTC 检测研究。利用 rVAR2 - 葡聚糖复合物，在多癌患者血样中检出 ofCS+ CTC，健康对照未检出，为多癌种 CTC 检测提供新方向。
癌症的早期诊断与精准治疗一直是医学领域的难题，循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells, CTCs）作为液体活检的重要生物标志物，能为癌症的诊断、预后评估和疗效监测提供关键信息。然而，传统的 CTC 检测平台主要依赖上皮细胞粘附分子（EpCAM）等上皮标志物，仅适用于上皮癌，且易受上皮 - 间质转化（EMT）等表型变化影响，难以检测非上皮来源或低表达上皮标志物的肿瘤细胞。此外，这类技术通常需要专门设备进行标准化检测，限制了其在不同癌症类型和医疗环境中的临床应用。因此，开发一种不依赖肿瘤来源和表型变化的通用型 CTC 检测方法成为迫切需求。
丹麦哥本哈根大学等机构的研究人员针对这一挑战，开展了以癌胚硫酸软骨素（Oncofetal Chondroitin Sulfate, ofCS）为靶点的 CTC 检测研究。他们发现，ofCS 作为一种在胎儿发育和肿瘤发生中共享的糖胺聚糖结构，广泛表达于多种恶性肿瘤细胞表面，且不受单一蛋白表达变化的影响。研究团队开发了一种基于 ofCS 靶向的平台无关性 CTC 检测策略，并将相关成果发表在《npj Precision Oncology》。
该研究主要采用以下关键技术方法：
- 样本队列：纳入两个独立队列，包括晚期癌症患者（含上皮和非上皮肿瘤）和疑似癌症但未确诊的门诊患者（DOC 队列），并以健康志愿者作为对照。
- rVAR2 - 葡聚糖复合物制备：利用生物素化的重组恶性疟原虫蛋白 VAR2CSA（rVAR2）与携带荧光素的葡聚糖（Dextran）偶联，构建 rVAR2:dextran 复合物，用于特异性结合 ofCS。
- 流式细胞术与免疫荧光染色：通过流式细胞术验证复合物与肿瘤细胞的结合特异性，利用免疫荧光染色在血样中识别 ofCS+、DAPI+、CD45-、CD66b-、CD16-的 CTC。
研究结果
1. rVAR2:dextran 与肿瘤细胞 ofCS 的特异性结合
流式细胞术显示，rVAR2:dextran 能浓度依赖性结合肺癌（A549）、卵巢癌（ES-2）、结直肠癌（COLO205）细胞，而与健康人外周血单个核细胞（PBMCs）结合极少。突变 rVAR2（WIW 基序替换为丙氨酸）完全丧失结合能力，酶消化实验证实其结合依赖于硫酸软骨素（CS）而非硫酸乙酰肝素（HS），表明复合物结合具有高度 ofCS 特异性。
2. 血样中肿瘤细胞的检测能力
将肿瘤细胞 spike 入健康人血液的实验显示，rVAR2:dextran 能有效识别 CTC，回收率超过 50%，且不受细胞数量影响，表明其具有高灵敏度和可靠性。免疫荧光图像显示，CTC 呈现多种形态，包括大细胞、长梭形细胞、细胞簇和小细胞，体现了肿瘤细胞的异质性。
3. 临床样本中的 CTC 检测
在晚期癌症患者队列中，25 例上皮癌患者中有 6 例（24%）检测到 ofCS+ CTC，3 例非上皮癌患者均检测到 CTC，涵盖非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤等多种类型，健康对照未检出。DOC 队列中，80 例疑似癌症患者经诊断后，11 例确诊癌症，其中 57.1% 的实体瘤患者检测到 CTC。值得注意的是，6 例未确诊患者中检测到 CTC，其中 1 例 15 个月后被诊断为转移性皮肤癌，提示该技术可能用于癌症的早期预警。
研究结论与讨论
本研究开发的 ofCS 靶向 CTC 检测策略，突破了传统上皮标志物的限制，实现了对上皮和非上皮癌症的广谱检测，且无需依赖磁富集或物理分离技术，为平台无关性 CTC 检测提供了新范式。rVAR2:dextran 复合物的高特异性和灵敏度，使其在复杂临床样本中能有效识别形态和表型异质的 CTC，尤其在 EMT 相关肿瘤细胞检测中具有优势。
尽管研究存在血样体积较小（4 mL）、造血系统肿瘤检测受限等局限性，但其在早期癌症筛查和未确诊患者中的应用潜力显著。例如，DOC 队列中部分患者在症状非特异性阶段即检测到 CTC，提示该技术可能缩短诊断延迟。未来结合更大血样体积或与其他平台联用，有望进一步提升检测效能。此外，ofCS 作为细胞表面标志物，为活细胞体外培养和转录组分析提供了可能，有助于深入解析 CTC 的分子特征和治疗靶点。
该研究为多癌种 CTC 检测提供了创新工具，推动了液体活检在精准肿瘤学中的应用，尤其为非上皮癌和早期癌症的诊断开辟了新方向。
