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为探究 SPOCK2 在肺腺癌（LUAD）中的作用，研究人员发现 LUAD 组织和细胞中 SPOCK2 表达下调。过表达 SPOCK2 可抑制 LUAD 细胞增殖、迁移，其细胞外囊泡（EVs）经雾化吸入也能抑制肿瘤生长，为 LUAD 治疗提供新方向。
肺癌作为全球发病率和死亡率位居前列的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占 85%-90%，而肺腺癌（LUAD）又是 NSCLC 中最常见的亚型，约占 40% 以上。尽管靶向治疗取得了一定进展，但 LUAD 患者的 5 年生存率仍低于 20%，即使接受手术治疗，仍有 30% 的 I 期患者会在五年内出现复发或转移。因此，深入探究 LUAD 的分子机制并开发新型治疗方法迫在眉睫。
SPOCK 家族蛋白作为脊椎动物细胞外基质（ECM）中的蛋白聚糖，在肿瘤进展等多种生理病理过程中发挥作用。其中 SPOCK2 在不同癌症中表现出相反的作用，但其在 LUAD 中的表达和功能尚不明确。来自苏州大学第四附属医院、徐州医科大学附属淮安医院等机构的研究人员开展了相关研究，旨在阐明 SPOCK2 在 LUAD 生长中的作用，并通过 SPOCK2 为 LUAD 提出新的治疗见解。该研究成果发表在《Discover Oncology》上。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：收集 LUAD 和正常肺组织样本，通过免疫组化（IHC）和蛋白质免疫印迹（Western blot）检测 SPOCK2 蛋白表达；利用 CCK-8、集落形成和 Transwell 实验检测细胞增殖和迁移能力；构建 LUAD 裸鼠皮下肿瘤模型和原位肿瘤模型；进行 RNA 转录组测序和富集分析；通过超速离心从 HEK293T 细胞中提取含 SPOCK2 的细胞外囊泡（SPOCK2-EVs），并对其进行表征；采用雾化吸入方式对裸鼠进行治疗，通过生物发光成像等技术评估肿瘤生长情况。
3.1 SPOCK2 在人类 LUAD 样本和细胞中下调
通过 UALCAN 数据库分析发现，LUAD 标本中 SPOCK2 表达显著低于正常组织。GEPIA 分析显示，SPOCK2 表达较高的患者总生存时间显著更长。免疫组化和 Western blot 结果也证实，LUAD 组织和细胞系中 SPOCK2 蛋白表达低于癌旁非肿瘤组织和正常人类支气管上皮细胞（BEAS-2B），提示 SPOCK2 在 LUAD 中可能发挥抑癌作用。
3.2 SPOCK2 抑制 LUAD 细胞体外增殖和迁移及体内肿瘤生长
将 SPOCK2 过表达慢病毒（LV-SPOCK2）转染 A549 和 H1944 细胞后，CCK-8 和集落形成实验表明细胞增殖显著减少，Transwell 实验显示细胞迁移受到抑制。裸鼠皮下注射转染 LV-SPOCK2 的 A549 细胞后，肿瘤体积和重量明显低于对照组，证实 SPOCK2 在体内具有抑癌作用。
3.3 SPOCK2 通过失活 MAPK 通路抑制 LUAD 细胞增殖和迁移
对转染 LV-SPOCK2 的 A549 细胞进行 RNA 转录组测序和 KEGG 富集分析，发现 SPOCK2 表达与 MAPK 通路相关。Western blot 显示，SPOCK2 过表达细胞中磷酸化 Erk（p-Erk）水平下调，而总 Erk 蛋白水平不变。使用 C16-PAF 激活 MAPK 通路后，逆转了 SPOCK2 过表达对 LUAD 细胞增殖和迁移的抑制作用，表明 SPOCK2 通过抑制 MAPK 通路发挥抑癌作用。
3.4 来源于 SPOCK2 修饰 HEK293T 的 EVs 可有效抑制 LUAD 进展
从过表达 SPOCK2 的 HEK293T 细胞中提取的 SPOCK2-EVs 呈球形，平均直径 171.9 nm，表达 HSP70 和 Tsg101 等 EVs 标志物，并含有 SPOCK2。与 SPOCK2-EVs 共培养的 LUAD 细胞中 SPOCK2 水平升高，p-Erk 水平降低，且细胞增殖和迁移受到抑制。裸鼠体内实验显示，瘤内注射 SPOCK2-EVs 可显著减小肿瘤体积和重量。
3.5 雾化吸入含 SPOCK2 的 EVs 可显著抑制小鼠 LUAD 生长
由于瘤内注射 EVs 在临床应用中存在局限性，研究人员探索了雾化吸入方式。通过定制的小鼠雾化吸入装置将 SPOCK2-EVs 以气溶胶形式递送，荧光成像显示，雾化吸入 SPOCK2-EVs 的小鼠肺部荧光显著减弱，肺组织中 SPOCK2 表达升高，p-Erk 水平降低，表明雾化吸入 SPOCK2-EVs 可有效抑制 LUAD 生长。
研究结论表明，SPOCK2 在 LUAD 中作为抑癌基因，通过抑制 MAPK 信号通路抑制细胞增殖和迁移，其通过 HEK293T 细胞外囊泡递送，无论是瘤内注射还是雾化吸入，均能有效抑制 LUAD 肿瘤生长。该研究首次揭示了 SPOCK2 在 LUAD 中的作用机制，并提出雾化吸入 SPOCK2-EVs 的新型治疗方法，为 LUAD 的临床治疗提供了新的思路和潜在策略。尽管研究仍存在一些局限性，如雾化吸入 EVs 的作用机制、最佳剂量和安全性等问题有待进一步研究，但该成果为 LUAD 的治疗开辟了新方向，具有重要的科学意义和临床转化潜力。
