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宫颈癌（CC）与 HPV 感染密切相关，近年发现 EB 病毒（EBV）与 HR-HPV 共感染加剧其风险。本研究探讨 EBV 核抗原 1（EBNA1）对 HeLa 细胞中 p53 通路调控基因 MDM2 和 MDM4 表达的影响，发现 EBNA1 显著上调 MDM4（p=0.028），提示其通过抑制 p53 促宫颈癌发展。
在女性恶性肿瘤的舞台上，宫颈癌（Cervical Cancer, CC）始终是不容忽视的 “杀手”，其发病率和死亡率在全球范围内居高不下。人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）作为明确的主要致病因子，几乎参与了 99.7% 的宫颈癌病例，但近年来越来越多的研究发现， Epstein-Barr 病毒（EB 病毒，Epstein-Barr Virus, EBV）与高危型 HPV（HR-HPV）的共感染现象在宫颈癌发展中扮演着更为复杂的角色。一项纳入 25 篇文献的 meta 分析显示，宫颈癌中 EBV 的感染率达 43.63%，显著高于健康人群的 19%，且随着宫颈上皮内瘤变（CIN）级别升高，EBV 阳性率从 CIN I 的 27% 逐步上升至 CIN2/3 的 35%，共感染时宫颈癌风险更是提升四倍。这表明 EBV 并非被动存在，而是主动推动着宫颈癌的进程。然而，EBV 究竟通过何种机制在宫颈细胞中 “兴风作浪”？其关键蛋白 EB 病毒核抗原 1（EBV Nuclear Antigen 1, EBNA1）在这一过程中又扮演了怎样的角色？这些问题成为解开 EBV 相关致癌机制的关键锁钥。
为了揭开这些谜团，来自伊朗设拉子医科大学（Shiraz University of Medical Sciences）的研究团队开展了一项聚焦于 p53 肿瘤抑制通路的研究。p53 作为 “基因组的守护者”，在调控细胞周期、诱导凋亡等方面起着核心作用，而其功能的抑制是肿瘤发生的重要环节。鼠双微体基因 2（Murine Double Minute 2, MDM2）和 MDM4（又称 MDMX）是 p53 通路的主要负调控因子 ——MDM2 通过泛素化标记 p53 使其降解，MDM4 则通过结合 p53 的转录激活结构域直接抑制其功能，两者的异常表达在多种癌症中均有报道。研究团队推测，EBNA1 可能通过调控这两个基因的表达，协同 HPV 的致癌作用，加速宫颈癌的发生。这项研究成果发表在《BMC Research Notes》上，为解析 EBV 的致癌机制提供了新视角。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：首先通过质粒转染技术，将携带 EBNA1 基因的 pCEP4 质粒和对照质粒分别导入 HPV-18 阳性的 HeLa 宫颈癌细胞系，利用潮霉素 B 筛选出稳定表达 EBNA1 的细胞株；随后运用实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）技术，检测 MDM2 和 MDM4 基因的 mRNA 表达水平，并通过 CtNorm 算法进行数据归一化，结合曼 - 惠特尼 U 检验进行统计学分析。
实时荧光定量 PCR 分析 EBNA1 转染后 MDM4 基因表达
qRT-PCR 结果显示，与对照细胞相比，EBNA1 转染的 HeLa 细胞中 MDM4 基因表达水平呈现显著的三倍提升（p=0.028），这一结果表明 EBNA1 对 MDM4 的调控作用具有统计学意义，提示其可能通过增强 MDM4 的表达来抑制 p53 功能。
实时荧光定量 PCR 分析 EBNA1 转染后 MDM2 基因表达
尽管 EBNA1 转染细胞中 MDM2 基因表达也出现了两倍的上调趋势，但差异未达到统计学显著性（p=0.11）。这一结果暗示 EBNA1 对 MDM2 的调控可能受到其他因素影响，或在不同细胞背景下存在差异。
在讨论部分，研究团队结合既往研究指出，EBNA1 作为 EBV 潜伏期全程表达的关键蛋白，可通过结合基因启动子调控宿主和病毒基因的表达。本研究中观察到的 MDM4 显著上调，与团队此前在胃癌细胞系 MKN45 中的发现一致，进一步支持了 EBNA1 通过激活 p53 抑制基因促进细胞存活的机制。值得注意的是，HPV 的 E6 蛋白已通过降解 p53 推动细胞转化，而 EBNA1 在此基础上进一步提升 MDM2/MDM4 水平，形成双重抑制 p53 的 “组合拳”，这或许解释了 EBV 与 HPV 共感染时宫颈癌风险的显著增加。此外，研究还提及 MDM2/MDM4 的遗传多态性（如 rs2279744、rs117039649）与妇科癌症易感性的关联，为后续研究提供了方向。
这项研究首次在 HPV 阳性的宫颈癌细胞中证实了 EBNA1 对 MDM2/MDM4 的调控作用，揭示了 EBV 在宫颈癌发展中的新机制 —— 通过增强 p53 抑制因子的表达，解除细胞凋亡限制，促进异常增殖。尽管研究存在仅使用单一细胞系、未涉及蛋白水平验证等局限性，但其为理解 EBV 与 HPV 的协同致癌作用提供了重要证据，也为靶向 MDM2/MDM4 的癌症治疗策略（如小分子抑制剂）增添了新的理论支持。未来若能在更多细胞模型及临床样本中验证，并深入探索其与 HPV 亚型的关联性，将进一步夯实 EBV 在宫颈癌中的致病地位，为宫颈癌的预防和治疗开辟新路径。
